Helixyte Green ssDNA 试剂

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产品介绍

合合成寡核苷酸可用于多种分子生物学技术，例如 DNA 测序、定点诱变、DNA 扩增和原位杂交。测量寡核苷酸和单链 DNA（ssDNA）浓度最常用的技术是测定 260 nm 处的吸光度（A260）。然而，吸光度法会受到核酸制备物中常见各种污染物（包括核苷酸、双链核酸和蛋白质）的严重干扰。

Helixyte™ Green ssDNA 定量试剂在灵敏度和选择性上均有显著提升，是定量 ssDNA 和寡核苷酸的理想替代方案。它是一种带正电荷的荧光探针，可与 ssDNA 的疏水口袋结合，通过堆积作用、疏水力、氢键和静电作用的协同效应，形成高发光复合物。Helixyte™ Green ssDNA 试剂本身背景荧光极低，与 ssDNA 结合后荧光显著增强。

相较于 260 nm 吸光度，Helixyte™ Green ssDNA 试剂具有更高的灵敏度，使研究人员能够使用标准荧光分光光度计（采用荧光素的激发和发射波长）定量低至 100 pg/mL 的寡核苷酸或 ssDNA（约 500 pg/mL）。使用荧光酶标仪则可检测低至 1 ng/mL 的寡核苷酸或 ssDNA。Helixyte™ Green ssDNA 试剂的检测线性范围宽，可从 100 pg/mL 至 1 μg/mL。

实验方案

概述

1.添加 100 µL 核酸标准品或测试样品
2.添加 100 µL Helixyte Green ALL溶液
3.在室温下孵育 5-10 分钟
4.检测Ex/Em=490/525 nm 处的荧光强度

注：以下方案是使用 Helixyte Green ssDNA 定量 ssDNA 的示例。打开前让所有成分升至室温。没有关于 Helixyte Green ssDNA 染色剂的致突变性或毒性的数据。由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。应特别小心处理 DMSO 原液，因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

溶液制备
ssDNA 标准溶液
将 10 uL 100 ug/mL ssDNA 标准溶液（未提供）添加到您选择的 190 uL 缓冲液中以获得 5 ug/mL 标准溶液，然后进行 1:3 稀释以获得连续稀释的 ssDNA 标准 (SS2-SS7) .请使用AAT Bioquest连续稀释计算器以方便数据处理。

Helixyte Green ssDNA 工作溶液
将 100 μL Helixyte Green ssDNA 试剂加入您选择的 10 mL 缓冲液中，制备 Helixyte™ Green ssDNA 工作溶液。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。
注意：建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备工作溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得佳效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。
注意：10 mL 的工作溶液对于一个 96 孔板就足够了。
注意：10 mM Tris-HCl (pH 8.0) 和 0.1 mM EDTA 可用于制备工作溶液和标准品。

操作步骤

表 1. ssDNA 标准品和测试样品在纯黑色 96 孔板中的布局。 SS= ssDNA 标准品（SS1 - SS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白控制； TS=测试样品

表2.各孔试剂组成

1.根据表 1和表 2 中提供的布局准备 ssDNA 标准 (NS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂，而不是 100 μL。
2.将 100 µL Helixyte Green ssDNA 工作溶液加入 ssDNA 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使测定体积为 200 µL/孔。 对于 384 孔板，将 25 µL 的 Helixyte Green ssDNA 工作溶液添加到每个孔中，以获得 50 µL/孔的总体积。
3.在室温下避光孵育反应 5 到 10 分钟。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm）处的荧光酶标仪检测荧光增加。