iFluor 488琥珀酰亚胺酯
| Ex (nm) | 491 | Em (nm) | 516 |
| 分子量 | 945.07 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品优势
iFluor® 488 琥珀酰亚胺酯是一种绿色荧光染料，激发波长为 488 nm，适用于荧光成像和流式细胞术应用。
即用型生物偶联：可标记蛋白质、抗体、胺修饰寡核苷酸及其他含胺生物分子的伯胺（R-NH₂）
光稳定性与亮度提升：与 FITC 相比，iFluor® 488 偶联物具有更强的荧光强度，且不易发生光漂白
平台验证：非常适用于荧光显微镜、流式细胞术和光谱流式细胞术
光谱兼容性：iFluor® 488 的光谱特性与 Alexa Fluor® 488 及 FITC 相似，可轻松融入现有实验流程
适用范围
主要用于标记蛋白或抗体
产品介绍
AAT Bioquest生产的iFluor 488琥珀酰亚胺酯是一种明亮的绿色荧光染料。用于成像和流式细胞分析中稳定信号的生成。iFluor 488琥珀酰亚胺酯是与蛋白或抗体偶联的常用工具。NHS 酯可用于标记蛋白、胺修饰的寡核苷酸和其他含胺分子的伯胺 (R-NH2)。
溶液配制
除非另有说明，所有未使用的储备液应在制备后分装，在 -20°C 下储存避免反复冻融
1.准备蛋白质储备溶液（溶液A）：
将 100 µL 反应缓冲液（例如，pH 值约为 8.5 至 9.0 的 1 M 碳酸氢钠溶液或 1 M 磷酸盐缓冲液）与 900 µL 目标蛋白溶液（例如，抗体、蛋白质浓度 > 2 mg/mL（如果可能））混合得到 1 mL 蛋白质标记储备液。
注1：蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0，则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。
注2：蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析，除去蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）。
注3：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞，获得好的标记结果。
注4：如果蛋白质浓度低于2 mg / mL，标记效率会显着降低。为获得合适标记效率，建议蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。
2.准备染料储备溶液（溶液B）：
将无水DMSO加入到iFluor 488 SE小瓶中制备10mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。
注意：在开始缀合前准备染料储备溶液（溶液B），立即使用。 染料储备溶液的长期储存会降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周，避光保存。 避免反复冻融。
样本实验方案
（本方案适用 Goat anti-mouse IgG 和iFluor 488 SE的共轭，每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能影响其结合亲和力，而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。）
进行偶联反应：
1.使用10：1摩尔比的溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）作为起始点：将5μl染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入到样品瓶中。蛋白质溶液（95μl溶液A）有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL，蛋白质的分子量为~200KD，蛋白质的浓度为~0.05mM。
注意：建议使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10:1。如果太少或太高，可以尝试5:1、15:1和20:1来确定合适的染料/蛋白质比。
2.在室温下继续旋转或摇动反应混合物30-60分钟
纯化偶联
（以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料蛋白偶联物的一个例子）
1.按照产品说明准备Sephadex G-25柱。
2.将“进行偶联反应”步骤中的反应混合物装入Sephadex G-25柱的顶部。
3.当样品刚低于顶部树脂表面时，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）。
4.向样品中加入更多的PBS（pH 7.2-7.4）完成柱子纯化。将含有目标染料-蛋白质缀合物的组分合并。
注意：如果需要立即使用，染料-蛋白质缀合物物需要用染色缓冲液稀释，并分装。
注意：为了长期储存，染料蛋白缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
试剂应用文献
