线粒体膜电位荧光探针JC-1 CAS 3520-43-2

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适用范围

用于标记活细胞线粒体

 

产品介绍

JC-1是一种独特的双色荧光探针（绿色/橙色），专门用于通过流式细胞术检测线粒体膜电位（ΔΨm），从而评估细胞健康状态。

JC-1是一种阳离子荧光染料，能够特异性标记活细胞中的线粒体。该染料的独特之处在于其荧光颜色会随线粒体跨膜电位（ΔΨM，80-100mV区间）的变化而发生可逆性转变：当膜电位升高时，JC-1单体（绿色荧光）会聚集成J-聚集体（橙色荧光）；反之当膜电位降低时，聚集体又可解离为单体。通过实时监测绿色（单体）与橙色（聚集体）荧光的强度比，即可精确定量线粒体膜电位的变化，这一特性使其成为研究细胞能量代谢和凋亡过程的理想工具。

尽管JC-1在众多实验室中被广泛使用，但其存在水溶性较差的问题。可以用JC-10探针替换。

 

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荧光显微镜
Ex:	490 nm
Em：	525 nm（比率分析为 590 nm）
推荐孔板:	黑色透明底板
通道：	FITC 和 TRITC通道

 

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荧光酶标仪
Ex:	490 nm
Em：	525 nm（比率分析为 590 nm）
推荐孔板:	纯黑色孔板

JC-1样品分析方案

概述

1.用测试化合物制备细胞

2.添加JC-1工作溶液

96孔板：每孔加入100 µL JC-1工作液；

384孔板：每孔加入25 µL JC-1工作液；

3.在室温或37℃孵育1小时，避光操作

4.移除JC-1工作溶液后立即检测

绿色荧光：Ex/Em = 490/525 nm

红色荧光：Ex/Em = 490/590 nm

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体实验进行调整修改。

 

储备溶液配制

所有未使用的储存液须分装为单次使用量，于-20℃避光保存，并避免反复冻融。

请使用高纯度无水DMSO将JC-1配制成2-10 mM的储存液，配制后应立即使用；如有剩余溶液需分装并于-20℃以下冷冻保存。

注意：避免反复冻融，避免光照。

 

工作溶液配置

配置1X JC-1工作溶液
实验当天，将JC-1固体溶于DMSO或取冻存母液（2-10 mM）回温至室温后，使用含20 mM Hepes的Hanks缓冲液（HHBS，pH 7.0）或自选缓冲液，加入0.02% Pluronic® F-127表面活性剂，配制10-30 μM的1X工作液，涡旋振荡混匀30秒。

 

样本实验方案

JC-1荧光酶标仪检测方案

1.使用待测化合物处理细胞至预定时间诱导凋亡（示例：Jurkat细胞可采用喜树碱处理4-6小时），空白对照孔（仅含培养基）加入等体积化合物缓冲液

2. 96孔板：每孔加入100 µL JC-1工作液；384孔板：每孔加入25 µL工作液

3. 37°C、5% CO2培养箱中避光孵育15-60分钟

注意事项

1.最佳孵育时间需根据具体细胞类型及接种浓度进行优化（原代细胞建议延长至45-60分钟）

2.建议设置CCCP（50μM）处理的阳性对照组

3.操作全程需避光

（注：本方案中JC-1工作液推荐浓度为5μM，具体需根据细胞类型调整）

4.移除孔板中的JC-1工作液，使用HHBS缓冲液或自选缓冲液洗涤细胞后，96孔板每孔加入100 µL HHBS缓冲液（384孔板每孔25 µL）。

5.在激发/发射 = 490/525 nm 和 490/590 nm 处监测荧光变化进行比率分析。

 

JC-1荧光显微镜或流式细胞仪检测方案：

1.使用测试化合物处理细胞至预定时间诱导凋亡（示例：Jurkat细胞可采用喜树碱处理4-6小时）；

2.离心细胞，调整密度至每管1-5×10⁵个。

3.使用500 μL JC-1工作液重悬细胞。。

4.室温或37℃避光孵育10-30分钟。

5.用HHBS缓冲液或自选缓冲液洗涤细胞后，以500 μL HHBS缓冲液重悬细胞，调整细胞密度至每管1-5×10⁵个。

6.使用荧光显微镜（FITC/TRITC滤光片组）或流式细胞仪（FL1/FL2通道），在激发/发射波长490/525 nm和490/590 nm下监测荧光变化。