线粒体膜电位荧光探针JC-1

货号22201存储条件f/l
规格50 mg价格9456
Ex (nm)515Em (nm)530
分子量652.23溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        线粒体膜电位荧光探针JC-1是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂,JC-1广泛用于通过流式细胞术确定线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体,并且随着线粒体膜电位增加(超过约80-100mV的值)可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于线粒体膜极化后JC-1聚集体的可逆形成导致发射光从530nm(即JC-1单体形式的发射)转变为590nm(即J-聚集形式的发射)。当在490nm处激发时,随着线粒体膜变得更加极化,JC-1的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1(FL1)中分析绿色发射,在通道2(FL2)中分析绿色橙色发射。使用JC-1的主要优点是它可以提供定性信息,考虑到从绿色到橙色荧光发射的转变,以及定量信息,考虑到纯荧光强度,可以在FL1和FL2通道中检测到。除了广泛用于流式细胞仪外,JC-1还用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微孔板平台中使用它的方案。尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用,但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。我们的JC-10具有比JC-1更好的水溶性,并且JC-10在一些细胞系中具有甚至优于JC-1的性能。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供最优质的线粒体膜电位荧光探针。



产品说明书

JC-1样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞

添加JC-1工作溶液(100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板)在室温或37℃孵育1小时

移除JC-1工作溶液

读取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光强度

注意:以下是我们推荐的活细胞方案。 该方案仅提供指南,实际情况应根据您的具体需求进行修改。

 

1.准备JC-1工作解决方案:

1.1在高质量无水DMSO中制备2至10 mM JC-1的储备液。 应及时使用原液; 应将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备1X JC-1工作溶液:在实验当天,将JC-1固体溶解在DMSO中或将等分试样的JC-1储备溶液解冻至室温。 在Hanks和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(pH 7)和0.02%Pluronic®F-127中制备10至30μM1XJC-1工作溶液。 通过votexing很好地混合它们。

注意:JC-1不溶于水,因此它会在溶液中聚集。 建议在将JC-1工作溶液加载到池中之前对其进行过滤。

 

2.用荧光酶标仪进行JC-1检测:

2.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间(例如,Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时)以诱导细胞凋亡。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-1工作溶液(来自步骤1.2)加入到细胞板中。

2.3将JC-1装载板在37℃,5%CO2培养箱中培养15-60分钟。

注意:适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

2.4从平板上取下JC-1工作溶液,用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

2.5监测Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化以进行比率分析。

 

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-1测定:

3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间(例如,Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时)以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞,每管取1-5×105个细胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重悬细胞(来自步骤1.2)。

3.4在室温或37°C下孵育10至30分钟,避光。

3.5用您选择的HHBS或缓冲液洗涤细胞。 将细胞重悬于500μLHHBS中以获得每管1-5×10 5个细胞。

3.6用荧光显微镜(使用FITC和TRITC滤光片)或流式细胞仪(使用FL1和FL2通道)观察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化。

 

参考文献

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说明书
线粒体膜电位荧光探针JC-1.pdf