线粒体膜电位荧光探针JC-10 JC-1的卓越代替品

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产品优势

1.JC-10具有比JC-1更高的信噪比

2.灵敏度高，测定偏差小

3.JC-10与荧光酶标仪。细胞成像仪和流式细胞仪兼容

适用范围

用于标记活细胞线粒体

产品介绍

JC-1在实验室广泛应用，但其水溶性差（即使在1μM浓度下也易在水性缓冲液中沉淀）限制了部分应用场景。为此我们开发了JC-10作为高浓度需求下的替代方案，其水溶性显著优于JC-1。JC-10能选择性进入线粒体，并随膜电位升高发生可逆的荧光颜色转变（绿色→橙绿色），该特性源于膜极化诱导的J-聚集体可逆形成：单体发射峰520nm（绿），聚集体发射峰570nm（橙）。当490nm激发时，线粒体膜电位极化程度增加将导致荧光颜色从绿色向橙绿色渐变。两种荧光信号可通过流式细胞仪常规配置的滤光片检测（FL1通道检测绿色信号，FL2通道检测橙绿色信号）。除流式检测外，JC-10同样适用于荧光显微成像，我们已开发配套的微孔板检测方案。在某些细胞系中，JC-10表现甚至优于JC-1，但其性能存在细胞系依赖性。

注意事项

本产品以~3mM（2mg/mL）的DMSO溶液形式提供，便于直接使用

JC-1样品分析方案

概述

1.用测试化合物制备细胞

2.添加JC-10工作溶液

96孔板：每孔加入100 µL JC-10工作液；

384孔板：每孔加入25 µL JC-10工作液；

3.在室温或37℃孵育1小时，避光操作

4.移除JC-1工作溶液后立即检测

绿色荧光：Ex/Em = 490/525 nm

红色荧光：Ex/Em = 490/590 nm

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体实验进行调整修改。

储备溶液配制

所有未使用的储存液须分装为单次使用量，于-20℃避光保存，并避免反复冻融。

每瓶DMSO储存液（100 µL，2 mg/mL，3 mM）只能使用一次。未使用的瓶子应储存在< -20°C。

注意：避免反复冻融，避免光照。

工作溶液配置

配置1X JC-10工作溶液
实验当天，将JC-10储存液（~3mM）回温至室温，使用含20mM Hepes的Hanks缓冲液（HHBS，pH 7-8）或自选缓冲液，加入0.02% Pluronic® F-127表面活性剂，稀释至终浓度10-30μM，涡旋振荡混匀30秒.

样本实验方案

JC-10荧光酶标仪检测方案

1.使用待测化合物处理细胞至预定时间诱导凋亡（示例：Jurkat细胞可采用喜树碱处理4-6小时），空白对照孔（仅含培养基）加入等体积化合物缓冲液

2. 96孔板：每孔加入100 µL JC-1工作液；384孔板：每孔加入25 µL工作液

3. 37°C、5% CO2培养箱中避光孵育15-60分钟

注意：孵育时间需根据具体细胞类型和浓度进行优化，建议每次实验前确定最佳孵育时长

4.在激发/发射 = 490/525 nm 和 490/590 nm 处监测荧光变化进行比率分析。

可选步骤：移除JC-10工作液后，96孔板每孔加入100 µL HHBS缓冲液（384孔板25 µL/孔）再进行检测分析。

JC-10荧光显微镜或流式细胞仪检测方案：

1.使用测试化合物处理细胞至预定时间诱导凋亡（示例：Jurkat细胞可采用喜树碱处理4-6小时）；

2.离心细胞，调整密度至每管1-5×10⁵个。

3.使用500 μL JC-10工作液重悬细胞。

4.室温或37℃避光孵育10-30分钟。

注意：孵育时间需根据具体细胞类型和浓度进行优化，建议每次实验前确定最佳孵育时长

5.使用荧光显微镜（FITC/TRITC滤光片组）或流式细胞仪（FL1/FL2通道），在激发/发射波长490/525 nm和490/590 nm下监测荧光变化。

可选步骤：检测前可移除孔板中的JC-10工作液，96孔板每孔加入100 µL HHBS缓冲液（384孔板每孔25 µL）后，再进行荧光显微镜观察。

试剂应用文献