Live or Dead 细胞活性检测试剂盒 *红/蓝双色荧光*

Live or Dead 细胞活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的细胞活性检测试剂盒，AAT Bioquest的Mycolight 细菌活力测定试剂盒可在革兰氏阳性和阴性细菌中提供细菌活力的双色荧光测定。该试剂盒利用我们的绿色荧光核酸染色剂MycoLight Green和红色荧光核酸染色碘化丙啶的混合物。单独使用时，MycoLight 绿色污渍通常会标记群体中的所有细菌（活的和死的）。相比之下，碘化丙锭只穿透膜受损的细菌，当两种染料都存在时，导致MycoLight 绿色染料荧光的减少。因此，使用MycoLight 绿色和碘化丙啶的适当混合物，具有完整细胞膜的活细菌发出绿色荧光，而具有损伤膜的死亡或濒死的细菌 产生红色荧光。Mycolight 细菌活力测定试剂盒是监测细菌种群活力的强大工具，可作为细胞膜完整性的函数。可以在510-530nm（FITC滤光片）和600-660nm（德克萨斯红色滤光片光片）处以488nm处（常见的激发光源）激发荧光测定染色的细胞。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Live or Dead 细胞活性检测试剂盒。 

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荧光显微镜
Ex:	Cy5 滤波片组（活），DAPI 滤波片组（死）
Em：	Cy5 滤波片组（活），DAPI 滤波片组（死）
推荐孔板:	黑色透明底板

 

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荧光酶标仪
Ex:	610, 360 nm
Em：	650, 450 nm
Cutoff：	630, 420 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	底读模式

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物制备细胞
2.添加染料加工溶液
3.在室温或37°C孵育30分钟至1小时
4.在Ex / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm，红色）和Ex / Em = 360/450 nm（截止= 420 nm，蓝色）或在荧光显微镜下观察（Texas red/Cy5通道   活细胞），（DAPI通道  死细胞）

 

工作溶液配制

将5μL的200X Cellbrite Red（组分A）和5μL的200X Nuclear Blue DCS1（组分C）加入1mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合以制备染料 - 工作溶液。 该染料加工溶液在室温下稳定至少1小时。 注意：由于染色条件可能因细胞类型的不同而异，因此建议单独确定组分A和C的适当浓度。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.根据标准方案准备细胞。 注意：我们用星形孢菌素（SS）在37℃下处理HeLa细胞4小时以诱导细胞凋亡。 详细信息请参见图1。

2.用100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的染料加工溶液替换生长培养基。

3.将染料加工溶液板在室温或37°C孵育30分钟至1小时，避光。

4.用HHBS，PBS或您选择的缓冲液洗涤细胞两次。

5.向细胞中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的测定缓冲液（组分B）。

6.用荧光显微镜监测荧光信号，用德克萨斯红或Cy5过滤器检测活细胞，用DAPI过滤死细胞。 还可以使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 610 / 650nm（截止= 630nm，红色）和Ex / Em = 360 / 450nm（截止= 420nm，蓝色）下分析荧光强度。

 

数据分析

图1.用Live或Dead 细胞活力测定试剂盒*双荧光*（Cat＃22788）标记的HeLa细胞的荧光图像。 将100,000细胞/孔/100μL的HeLa细胞在96孔黑壁/透明底板中接种过夜。 将细胞用0-1μM星形孢菌素（SS）在37℃处理4小时（A-D），或在乙醇（E）中固定，然后与染料加载溶液一起温育1小时。 荧光信号分别使用具有德克萨斯红或Cy5过滤器的荧光显微镜测量活细胞（红色）和用于坏死细胞的DAPI过滤器（蓝色）。（F）使用FlexStation®酶标仪（Molecular Devices）测量相应的荧光信号，底部读数模式为Ex / Em = 610/650（截止= 630nm，红色），Ex / Em = 360/450（截止= 分别为420nm，蓝色）。

 

参考文献

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产品名称	货号
Cell Meter 细胞活性检测试剂盒 *绿色/红色双重荧光*	Cat#22789