MMP-3 Green 基质金属蛋白酶绿色荧光底物

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适用范围

可用于监测MMP-3酶活性。在使用纯化MMP-3酶时，也可用于筛选MMP-3抑制剂

 

产品介绍

基质金属蛋白酶（MMPs）是一类锌依赖性内肽酶家族，主要作用于细胞外基质。这些酶负责分解结缔组织，在骨重塑、月经周期和组织损伤修复过程中具有重要作用。虽然MMPs在某些病理过程中的具体贡献难以评估，但它们在关节炎的发展以及癌症侵袭和转移过程中均发挥关键作用。MMPs通常具有多重底物特异性，大多数家族成员能够降解不同类型的胶原蛋白以及弹性蛋白、明胶和纤连蛋白，因此寻找对单一MMP酶具有选择性的底物十分困难。

MMP-3 Green 基质金属蛋白酶绿色荧光底物经特殊设计，对MMP-3具有相对较高的选择性，可用于监测MMP-3酶活性。在使用纯化MMP-3酶时，也可用于筛选MMP-3抑制剂。

MMP-3 Green 基质金属蛋白酶绿色荧光底物基于TF2/TQ2荧光共振能量转移对构建。经MMP-3水解后，由于TF2/TQ2 FRET对发生分离，MMP-3 Green™ FRET肽底物的荧光强度显著增强，其荧光增强程度与MMP-3酶活性成正比。

实验方案摘要

1.加入适量对照或测试样品（50 µL）

2.预孵育10-15分钟

3.加入MMP-3 Green™底物工作液（50 µL）

4.动力学读数无需孵育，终点读数需孵育30-60分钟

5.于Ex/Em = 490/525 nm监测荧光强度

重要提示

实验前需将粉末状组分恢复至室温。按需制备含MMP-3的生物样品。

储备液配

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，于-20°C保存并避免反复冻融。

MMP-3 Green™底物储备液

用DMSO溶解MMP-3 Green™底物，配制1-2 mM储备液。注：需分装为单次使用量保存。

 

工作液制备

MMP-3 Green™底物工作液

将MMP-3 Green™底物储备液用自选缓冲液稀释至5-25 µM工作浓度。注：可使用Tris缓冲液；实际浓度需根据应用优化

MMP-3稀释液

若使用纯化MMP-3，用自选缓冲液稀释至适宜浓度。注：MMP-3使用前需激活；避免剧烈涡旋酶溶液

抑制剂与化合物稀释

若筛选MMP-3抑制剂，按需配制已知MMP-3抑制剂及测试化合物的适宜浓度

 

样本实验方案

1.按需制备含MMP-3的生物样品

2.按方案激活pro-MMP-3：将含MMP-3样品或纯化MMP-3与等体积2 mM APMA工作液（2X）在37°C孵育24小时（注：需实验前即时激活）

3.按表1和表2布局制备对照组与测试样本（TS）：384孔板每孔试剂体积改为20 µL

4.筛选抑制剂时，将反应板在适宜温度（如25°C或37°C）预孵育10-15分钟

5.向检测板样品孔和对照孔中加入50 µL（96孔板）或20 µL（384孔板）MMP-3 Green™底物工作液，充分混匀

6.用荧光酶标仪在Ex/Em = 490/525 nm监测荧光强度：

动力学读数：立即开始测量，每5分钟记录数据持续30-60分钟

终点读数：室温避光孵育30-60分钟，混匀后测量

 

表1. 96孔微孔板中对照组（按需设置）与测试样本布局：SC=底物对照，IC=抑制剂对照，VC=溶剂对照，TC=测试化合物对照，TS=测试样本

SC	SC	...	...
IC	IC
VC	VC
TC	TC
TS	TS
...	...
...	...

 

表2. 各孔试剂组成

Well	Volume	Reagent
SC	50 µL	Buffer of your choice
IC	50 µL	MMP-3 dilution and known MMP-3 inhibitor
VC	50 µL	MMP-3 dilution and vehicle used to deliver test compound
TC	50 µL	MMP-3 containing buffer and test compound
TS	50 µL	MMP-3 dilution with test compound