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4-甲基伞形酮磷酸酯 MUP无游离酸 CAS 3368-04-5

英文名称:MUP [4-Methylumbelliferyl phosphate, free acid] *CAS 3368-04-5*
产品参数
Ex (nm)360Em (nm)448
分子量256.15溶剂Water
存储条件在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

MUP [4-甲基伞形酮磷酸酯]是美国AAT Bioquest生产的荧光素,磷酸酶的荧光底物。它用于检测溶液中的磷酸酶。然而,这种磷酸酶底物不太适合活细胞或连续测定,因为酶产物 MU(4-甲基伞形酮)仅在 pH 值 >10 时发出最大荧光。因此,使用 MUP 检测具有酸性最佳 pH 范围的磷酸酶(例如酸性磷酸酶)也很困难。 AAT Bioquest 提供 MUP Plus,它的开发是为了解决与 MUP 底物相关的 pH 限制。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的MUP [4-甲基伞形酮磷酸酯]。 

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实验方案

磷酸盐底物的测定方案

概述

在Tris缓冲液(50μL)中制备10-50μM磷酸盐

添加磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)

在室温或37℃孵育30至120分钟监测荧光强度

注意:以下是溶液中磷酸酶测定的推荐方案。 该说明仅提供指导,应根据具体需要进行修改。

 

1.准备工作解决方案:

1.1在溶剂中制备2至10 mM的储备溶液(见说明书中的表)。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃冷冻。

注意1:不要使用DMSO,ETOH或METH制备SunRed™磷酸盐(目录号11629)的原液,因为它可以显著提高分析背景。

注意2:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备2X磷酸盐工作溶液:在实验当天,将底物溶解在溶剂中或在室温下解冻等份的储备溶液(来自步骤1.1)。在100 mM Tris缓冲液或您选择的缓冲液(pH 8至9)(非磷酸盐缓冲液)中制备10至50μM的2X工作溶液。

 

2.在上清液中进行磷酸酶测定:

2.1将50μL2X磷酸盐工作溶液(来自步骤1.2)加入磷酸酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总磷酸酶测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL2X磷酸盐工作溶液。

2.2在所需温度下孵育反应30至120分钟,避光。

2.3用荧光板读数器检测适当滤光片组(见说明书中的表)的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光(仅用测定缓冲液)用作对照,并从具有磷酸酶反应的那些孔的值中减去。

 

参考文献

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