Peko Green双链核酸染料

货号TJ1701存储条件 建议在低于-15℃温度下冷冻保存
规格1 ml价格1750
Ex (nm)502Em (nm)523
分子量溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

Peko Green 染料是一种新型的dDNA染料。其检测灵敏度高,可检测到pg级DNA。检测范围宽,可跨越4个数量级。特异性好,基本不受ssDNA和RNA的影响,并且可以耐受一定浓度的盐,尿素,已醇,氯仿,去垢剂,蛋白等干扰。对微量的双链DNA进行定量在各种生物学应用中都显得非常重要。例如cDNA文库的构建,亚克隆的DNA片段的纯化,定量DNA扩增产物,在药物中DNA分子残留的测定等。检测核酸浓度最常用的方法就是检测核酸在260nm (A260)处的光吸收,此方法主要的缺点是单链核酸和单核苷酸会产生干扰信号,核酸样品中的杂质也会影向结果。光吸收不能区分DNA和RNA,灵敏度也相对较低(用1cm的比色杯在A260值为0.1时相对应的双链DNA浓度为5μg/mL)。目前使用Peko Green 染料定量检测DNA已经广泛用于生物学检测。



产品说明书

实验方法

1.试剂准备

Peko Green是以1毫升的浓缩液形式保存在无水DMSO(二甲基亚砜)中。实验当天,配制2x Peko Green试剂的工作溶液,用1xTE液(10mM的Tris-HCl,1mM EDTA中,pH值为7.5)按1:200的比例稀释浓缩液。如果要准备好足够的工作液检测20个样品,可在20毫升1xTE加入100μL Peko Green dsDNA定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在一个塑料容器中配制。Peko Green试剂容易光降解,所以应将配好的溶液用箔包主或放置暗处避光保存。溶液最好在配制数小时内使用,以保证最佳结果。

 

2.DNA标准曲线

2.1 标准品工作液的配制:

Sigma小牛胸腺DNA干粉(货号:D4522-1MG)1mg (Tris, NaCL等浓度已成标准体系),加入1mL双蒸水,配制成1mg/mL的标准工作液。

 

2.2 标准品工作液的稀释:

母液稀释:取10mL(1mg/mL) 标准品工作液加入到990 μLTE溶液中,稀释成10μg/mL。再取10μL(10mg/mL)标准品工作液加入到990 μLTE溶液中,稀释成100ng/mL。

倍比稀释:取800μL(100ng/mL) 标准品工作液加入到200 μLTE溶液中,稀释成80ng/mL(药典规定:荧光染色方法DNA含量在。25-80ng/mL范围线性较好,此方法DNA检出限为0.3ng/mL)。再取500mL(80ng/mL)标准品工作液加入到500 mLTE溶液中,浓度稀释到40ng/mL。然后按倍比稀释成20ng/mL,10ng/mL,5ng/mL,2.5ng/mL,1.25ng/mL,0.625ng/mL的标准品溶液,见表1。

 

表 1标准品工作液及样品排续在一个实心的黑色96孔板*

DS0 DS0 样品 样品
DS1 DS1 ... ...
DS2 DS2    
DS3 DS3    
DS4 DS4    
DS5 DS5    
DS6 DS6    
DS7 DS7    

*备注: DS= 标准品工作液从0到40ng/mL平行样品

 

3.双链DNA样品分析

3.1倍比稀释后的各梯度标准品溶液,样品,和染料工作液各取100μL混匀,避光室温放置5分钟见表1。

备注: 如果用 384孔板, 则倍比稀释后的各梯度标准品溶液,样品,和染料工作液各取25mL即可。

3.2用荧光酶标仪在激发/发射波长= 490/525 nm(截止波长为510 nm)检测荧光强度。

3.3样品DNA 含量可根据标准品曲线算出。