Portelite 荧光法RNA定量试剂盒*优化于 Cytocite 和 Qubit 荧光仪*

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产品优势

超高灵敏度检测：使用CytoCite™或Qubit™荧光计时，可检测低至5 ng/mL的RNA浓度

 

适用范围

用于溶液中RNA的定量

 

产品介绍

检测与定量微量RNA对于多种生物学应用至关重要，例如体外转录RNA的产量测定，以及进行Northern印迹分析、S1核酸酶测定、RNase保护分析、cDNA文库构建、逆转录PCR和差异显示PCR前的RNA浓度测量。

目前最常用的核酸浓度检测方法是测定260 nm处的吸光度。但这种基于吸光度的方法易受蛋白质、游离核苷酸及其他紫外吸收化合物的干扰。使用灵敏且特异性的荧光核酸染料则可有效缓解此干扰问题。

StrandBrite™ RNA定量试剂是一种超灵敏荧光核酸染料，用于溶液中RNA的定量。使用CytoCite™或Qubit™荧光计时，该试剂可检测低至5 ng/mL的RNA浓度。我们的StrandBrite™ Green荧光RNA定量试剂盒包含StrandBrite™ Green核酸染料及一套经优化的稳健操作方案，为溶液中RNA定量提供了一种便捷方法。

 

成分

样品分析方案

概述

准备 StrandBrite RNA 工作溶液

将 190 µL StrandBrite™ RNA 工作溶液添加到每个 0.2 mL PCR 管中

将 10 µL RNA 标准品或测试样品添加到每个管中

室温孵育2分钟

使用 CytoCite™ 或 Qubit™ 荧光计检测荧光

注：在开始实验之前，将所有套件组件置于室温下。

 

溶液配制

StrandBrite™ RNA 工作溶液

将 StrandBrite Green（组分 A）在测定缓冲液（组分 B）中稀释 200 倍。例如，要为 8 个样品准备足够的工作溶液，请将 5 µL StrandBrite Green（组分 A）添加到 1 mL 测定缓冲液（组分 B）中。

注意 用箔纸覆盖工作溶液或将其置于黑暗处，以避光。我们建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备该溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。为了获得最佳效果，该溶液应在制备后几小时内使用。

 

实验方案

可接受的样品体积范围为 1~20 µL，具体取决于 RNA 样品的估计浓度。推荐样品体积为 10 µL，RNA 浓度在 0.01~10 ng/µL 范围内。如果使用其他样品体积，请调整浓度计算中的稀释系数。

以下实验方案是基于 10 µL 样品体积、RNA 浓度在 0.01~10 ng/µL 范围内生成的。

1.将 190 µL StrandBrite Green 工作溶液添加到每个 CytoCite 样品管 (#CCT100) 或等效的 0.2 mL PCR 管中。

注意 使用薄壁聚丙烯透明 0.2 mL PCR 管，例如#CCT100。

2.将 10 µL RNA 标准品 #1 和 #2 或测试样品添加到每个管中，然后通过涡旋 2~3 秒进行混合。

3.将所有管在室温下孵育 2 分钟。

4.将样品插入 CytoCite™ 或 Quibit™ 并用绿色荧光通道检测荧光。请遵循适用于 CytoCite™ 荧光计的程序。

有关说明，请参阅：https://devices.aatbio.com/documentation/user-manual-for-cytocite- Fluorometer

 

标准校准曲线的制备（可选）

对于 StrandBrite™ 检测，您可以选择使用 RNA 标准品制作校准曲线。以下是生成定制 RNA 标准曲线的简要方案：

1.使用 Assay Buffer 进行 1/3 系列稀释，使用 RNA Standard #2 获得 10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01 和 0 ng/μL RNA 标准稀释液。

2.将 190 µL StrandBrite™ Green 工作溶液添加到每个管中。

3.将 10 µL RNA 标准品或测试样品加入每个管中，然后涡旋 2~3 秒进行混合。

4.将反应物在室温下孵育 2 分钟。

5.将样品插入 CytoCite™ 并用绿色荧光通道检测荧光。