Q4ever Green核酸染料 *2000X DMSO 溶液*

产品货期

咨询

产品介绍

实时荧光聚合酶链反应（real-time PCR），亦称定量聚合酶链反应（qPCR），是基于聚合酶链反应（PCR）的分子生物学常用实验技术。与传统PCR在反应结束后进行检测不同，实时PCR可对靶标DNA分子的扩增过程进行实时监测。该技术既可用于绝对定量（定量实时PCR），也可用于半定量（即判断DNA分子量是否超过特定阈值）。实时PCR主要采用两种检测方法：（1）非特异性荧光染料——可结合所有双链DNA；（2）序列特异性DNA探针——带有荧光报告基团的寡核苷酸，仅在探针与互补序列杂交后产生信号。

对于第一种方法，实时PCRDNA结合染料需满足两大要求：（a）与双链DNA结合后荧光显著增强；（b）对PCR抑制效应极低。SYBR Green是目前qPCR应用中最主流的染料。我们最新开发的Q4ever™ Green作为SYBR Green的升级产品，有效改善了酶抑制等局限性。Q4ever™ Green在PCR过程中几乎不抑制反应且灵敏度更高，可监测任何双链DNA序列的扩增。该染料无需使用探针，在引物设计优化且反应体系成熟的条件下可显著降低检测成本。

与SYBR Green相同，其主要缺点在于可能产生假阳性信号——因Q4ever™ Green染料会结合所有双链DNA（包括非特异性序列）。因此必须确保引物不扩增非靶标序列，并进行熔解曲线分析以验证结果特异性。

实验方案

储存在-20°C，避光。 按建议存放时，产品自收到之日起至少稳定12个月。

工作溶液配制

Q4ever Green工作溶液（50X）
使用水或TE缓冲液稀释2000X Q4ever Green储备溶液以制成50X Q4ever Green储备溶液。

操作步骤

建议使用以下协议。 如果需要，可以调整方案以达到佳效果。

设置PCR反应如下：
5 µL 10X聚合酶缓冲液（不含镁）
2.5 µL的50 mM MgCl₂
2 µL 50X Q4ever Green工作溶液
2 µL的5 mM dUTP
1-5个单位的DNA聚合酶
加入所需的cDNA
每个引物100-1000 nM（正向和反向引物的终浓度）
用dH₂O将终体积调整为50 µL。
在热循环荧光计上执行实时PCR并记录荧光信号。