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ReadiLink iFluor 647 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒

英文名称:ReadiLink™ iFluor® 647 Nick Translation dsDNA Labeling Kit
ReadiLink iFluor 647 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒
价格 5020
产品规格
10 Reactions

产品货号
产品参数
Ex (nm)656Em (nm)670
分子量N/A溶剂-
存储条件-
产品概述

ReadiLink iFluor 647 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法,可以使用明亮且光稳定的 iFluor 647 染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链,iFluor 647 染料与之结合。此外,该试剂盒允许用户通过调整 iFluor 647-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容,包括人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 iFluor 647 标记 DNA 可用于多种分子生物学技术,例如荧光原位杂交 (FISH)。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的ReadiLink iFluor 647 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒。

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实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备 DNA 样本
  2. 向试管中加入试剂
  3. 短暂混合并离心
  4. 在 15°C 下孵育 60 分钟
  5. 将反应置于冰上,然后加入停止溶液并在 65°C 下加热
  6. 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
  7. 纯化标记的 DNA

 注:在开始实验之前,解冻所有成分。在开始标记过程之前,将所有试剂短暂涡旋至底部。

 

实验步骤

表 1. 各反应每管试剂组成

成分 规格
DNA样本 1 µg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 µL
Nick Translation 缓冲液 5 µL
dNTP 混合物 5 µL
dTTP 2 µL
iFluor 647-dUTP 工作溶液 2 µL
DNA聚合酶I 1 µL
DNA酶I 1 µL
总容积 50 µL
可以优化 iFluor 647-dUTP(组分 A):dTTP(组分 E)的比例以获得佳标记条件。
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记,但可能会缩短终产品的尺寸。
1.向干净的(无核酸酶)0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中,按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后,将反应置于冰上。
5.要终止反应,请添加 5 µL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。
 
 
参考文献

Identification of bacterial cells by chromosomal painting.
Authors: Lanoil, B D and Giovannoni, S J
Journal: Applied and environmental microbiology (1997): 1118-23

Cyanine dye dUTP analogs for enzymatic labeling of DNA probes.
Authors: Yu, H and Chao, J and Patek, D and Mujumdar, R and Mujumdar, S and Waggoner, A S
Journal: Nucleic acids research (1994): 3226-32