抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 420

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规格2 Labelings价格1896
Ex (nm)403Em (nm)427
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

ReadiLink Rapid mFluor 420 蛋白标记试剂盒提供了一种以微观方式标记抗体的最便捷方法。该试剂盒仅需要两个简单的混合步骤而无需纯化步骤。 试剂盒中使用的iFluor 和mFluor 染料的琥珀酰亚胺酯(SE)显示出与蛋白质的脂族胺的良好反应性和选择性,并形成羧酰胺键,其与天然肽键相同且稳定。 iFluor 和mFluor-抗体缀合物可用于免疫荧光染色,荧光原位杂交,流式细胞术和其他生物学应用。 每个ReadiLink 抗体标记试剂盒都提供了进行两次偶联反应(2x50μg蛋白质)的所有必需成分。 每个试剂盒可用于标记50-100μg单克隆,多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kDa),只需两个简单的混合步骤。抗体标记试剂盒ReadiLink Rapid mFluor 420是美国AAT Bioquest研发的产品。



产品说明书

标准操作规程(标记50μg蛋白质)

      将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

 

1.准备蛋白质溶液(溶液A):

为了标记50g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将5L(总反应体积的10%)的反应缓冲液(组分B)与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2:为了标记100g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将10μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5超滤瓶,Ultracel-10超滤膜膜,10 kDa(来自Millipore的cat#UFC501008)去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)。

注4:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记。

注5:如果蛋白质浓度小于1 mg / mL,则结合效率明显降低。为获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

 

2.运行结合反应:

2.1将蛋白质溶液(溶液A)加入一瓶标记染料(组分A)中,通过反复移液几次将其混合均匀,或将小瓶涡旋几秒钟。

注意:如果要标记100 µg蛋白质,请使用两个小瓶(组分A),将100 µg蛋白质分成2 x 50 µg蛋白质,并使每个50 µg蛋白质与一小瓶标记染料反应,然后合并两个小瓶,用于下一步。

2.2将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.停止共轭反应:

3.1加入5 µL TQ染色淬灭缓冲液(组分C)(对于50 µg蛋白质)或加入10 µL TQ染色淬灭缓冲液(组分C)(对于100 µg蛋白质)。加入的缓冲液是总反应体积的10%。

3.2在室温下孵育10分钟。

3.3标记的蛋白质(抗体)现在可以使用了。

参考文献

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Suramin inhibits cullin-RING E3 ubiquitin ligases
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Journal: Proceedings of the National Academy of Sciences (2016): E2011--E2018

Glycosaminoglycan mimicry by COAM reduces melanoma growth through chemokine induction and function
Authors: Helene Piccard, Nele Berghmans, Eva Korpos, Chris Dillen, Ilse Van Aelst, Sandra Li, Erik Martens, Sandra Liekens, Sam Noppen, Jo Van Damme
Journal: International Journal of Cancer (2012): E425--E436

 

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说明书
抗体标记试剂盒 ReadiLink Rapid mFluor 420.pdf