ReadiLink™AF488抗体快速标记试剂盒

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产品优势  

1.可标记约 2×50 µg 抗体（每管 XFD488 染料标记 50 µg 抗体）

2.操作流程简单便捷，无需柱纯化步骤

 

适用范围

主要用于标记抗体 

 

产品介绍

AAT Bioquest公司生产的XFD488荧光染料与ThermoFisher的Alexa Fluor® 488（注册商标）具有完全相同的化学结构。ReadiLink™蛋白标记技术是目前制备荧光抗体偶联物强大便捷的工具，专为荧光成像和流式细胞术应用而设计。适用于流式细胞术、免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）、蛋白质印迹（WB）、 酶联免疫吸附测定（ELISA）等应用。

ReadiLink™ Rapid XFD488抗体标记试剂盒提供了最便捷的XFD488标记抗体制备方案，其采用的XFD488染料稳定性好，与蛋白质氨基基团具有良好的反应活性。该试剂盒包含标记约2×50 μg抗体所需的组分，每管XFD488染料可标记~50 μg抗体。该标记流程操作简便耗时极短，制备的XFD488标记抗体无需纯化即可直接用于荧光成像和流式细胞实验，是目前制备XFD488标记抗体最便捷的方法。

实验前重要提示：

请将所有组分恢复至室温后短暂离心，开盖前确保管壁附着物完全沉降；所有工作液需现用现配，配制完成后请立即开始偶联反应。本操作方案为推荐流程，实际实验条件可根据具体研究需求进行优化调整（注：建议首次使用时严格遵循推荐方案以确保标记效率）

 

标准操作规程（标记50μg蛋白质）

将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心，并在开始结合前准备所需的溶液。

1.准备蛋白质溶液（溶液A）：

1.1 标记50µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL）， 取50 µL目标蛋白溶液，加入5 µL反应缓冲液（组分B，占总体积10%）

注：如果您的蛋白质浓度不同，请相应调整蛋白质体积，使~50μg蛋白质可用于标记反应。

 

1.2 标记100µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1mg / mL），取100 µL目标蛋白溶液，加入10 µL反应缓冲液（组分B，占总体积10%）

 注：推荐使用pH 7.2-7.4的1X PBS缓冲液;

若蛋白溶解于甘氨酸缓冲液，需先透析至PBS或使用Millipore UFC501008超滤管（10 kDa截留分子量）去除游离氨基/铵盐（如硫酸铵、乙酸铵等）

 注：不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白（BSA）抗体或明胶标记效率显著降低。

 注：建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL； 当浓度<1 mg/mL时偶联效率将显著下降。

 

2.偶联反应：

2.1 将蛋白质溶液（溶液A）加入到一瓶标记染料（组分A）中，通过反复移液几次将其混合均匀，或将小瓶涡旋几秒钟。

注： 若标记100 µg蛋白，需将蛋白样本均分为两份（各50 µg），分别与两管标记染料反应后合并。

2.2 将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.终止偶联反应：

3.1   50 µg蛋白标记，加入5 µL TQ染料淬灭缓冲液（组分C）；

       100 µg蛋白标记，加入10 µL TQ染料淬灭缓冲液（组分C）；

        加入的缓冲液是总反应体积的10％。

3.2   混匀后室温静置10分钟，标记蛋白即可使用

 

4.蛋白偶联物的储存条件

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质结合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。