Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

货号36320存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格10 Plates价格5136
Ex (nm)336Em (nm)505
分子量溶剂
产品详细介绍


简要概述

钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体(GPCR)药物发现的首选方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道激活引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fura-2AM预加载,Fura-2AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内,亲脂封闭基团Fura-2AM被酯酶裂解,导致带负电荷的荧光染料留在细胞内,其荧光波长在与钙结合时蓝移。当细胞受到激动剂刺激时,受体发出细胞内钙离子释放的信号,从而大大提高Fura-2在短波处的荧光强度。Fura-2的比色特性使该试剂盒成为比单波长Fluo-4更精确测定细胞钙浓度的理想工具。通过单次添加,该分析很容易在高透性环境中进行。该方法可用于96孔或384孔微孔板,且易于自动化。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 340/380nm
发射: 510nm
cutoff: 470nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式
其他可用仪器:
FDSS, FLIPR, FlexStation


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Fura-2 AM染料加载溶液(对于96孔板为100 µL /孔,对于384孔板为25 µL /孔)
  3. 在室温下孵育1-2小时
  4. 检测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Fura-2 AM储备溶液:将200 µL DMSO加入小瓶Fura-2 AM(组分A)中,并充分混合。 注意:20 µL Fura-2 AM储备溶液足以装满一块板。 如果试管密封严密,可将未使用的Fura-2 AM储备溶液分装并在<-20℃下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液(1X):a)对于#36320(10板试剂盒),通过将9mL HHBS(组分C)添加到10XPluronic®F127 Plus(1 mL,组分B)中来制成1X分析缓冲液,并充分混合。
b)对于#36321(100个板试剂盒),通过向10XPluronic®F127 Plus(10 mL,组分B)中加入90 mL HHBS(未包括)制成1X分析缓冲液。 注意:10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Fura-2 AM染料加载溶液:将20 µL Fura-2 AM储备溶液添加到10 mL 1X分析缓冲液中,并充分混合。 注意:该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Fura-2 AM染料加载溶液添加到细胞板中。 注意:如果您的化合物干扰血清,则需要用HHBS缓冲液代替生长培养基。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时,然后在室温下再孵育20分钟。 注意:如果测定需要37℃,请立即进行实验,而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处的荧光增加来进行钙通量测定。 注意:在实验前进行信号测试非常重要。 不同的仪器具有各自的强度范围。 注意:对于在FDSS上进行的测定,请在仪器上对Fura-2钙测定使用标准滤波器。
 

图示

图1.用Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒测量的CHO-K1细胞中的ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒在室温下孵育1小时。 通过FlexStation(分子设备)添加ATP(50 µL /孔)以达到最终指示的浓度。

 

 

参考文献

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说明书
Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒.pdf