trFluor Tb马来酰亚胺
货号1444存储条件F/L
规格100 ug价格3540
Ex (nm)330Em (nm)544
分子量1123.92溶剂DMSO
产品详细介绍


简要概述

        trFluor Tb马来酰亚胺是美国AAT Bioquest生产的荧光染料,存在于细胞,血清或其他生物流体中的许多生物化合物是天然荧光的,因此使用常规的快速荧光团导致测定灵敏度的严重限制,这是由于待测定的生物分子的自发荧光引起的高背景。使用长寿命荧光团结合时间分辨检测(激发和发射检测之间的延迟)可以最大限度地减少瞬间荧光干扰。我们的trFluor Eu探针可为需要高灵敏度的分析启用时间分辨荧光检测(TRF)。与更传统的荧光团如Alexa Fluor或花青染料相比,这些trFluor Eu探针具有较大的斯托克斯位移和极长的发射半衰期。与其他TRF化合物相比,我们的trFluor Eu探针具有相对较高的稳定性,高排放产量和与生物分子相关的能力。此外,我们的trFluor Eu探针在与抗体等生物聚合物结合时对荧光猝灭不敏感。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的trFluor Tb马来酰亚胺。 

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产品说明书

样本标记步骤

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与trFluor Eu SE的缀合物开发的。请根据您的具体实验进行调整。

 

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100L反应缓冲液(例如,1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900L目标蛋白质溶液(例如抗体,蛋白质浓度> 2mg / ml,如果可能)混合,得到1 mL蛋白标记储备液。

注意1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。 如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注意2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。 如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注意3:用牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的不纯抗体或抗体不能很好地标记。 叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。 可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得最佳标记结果。

注意4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率显着降低。 为获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到小瓶trFluor?Eu SE中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合之前准备染料储备溶液(溶液B),需及时使用。染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。避免冻融循环。

 

3.确定最佳染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。 蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响,而低染料/蛋白质比率的蛋白质结合物会降低灵敏度。 我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。 通常,对于大多数染料 - 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

 

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。 蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。 假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行结合反应(见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1; 分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比例(DOS)(见下文)。

3.6运行上述4种结合物的功能测试,确定最佳的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1在有效摇动下,将适量的染料储备溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。

注意:溶液B /溶液的最佳摩尔比由步骤3.6确定。 如果跳过步骤3,我们建议使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接来自步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3一旦样品在顶部树脂表面下方运行,加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4将更多PBS(pH 7.2-7.4)加入所需样品中以完成柱纯化。 合并含有所需染料 - 蛋白质缀合物的级分。

注意1:立即使用时,染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注意2:对于长期储存,染料 - 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥(见说明书)。

 

参考文献

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说明书
trFluor Tb马来酰亚胺.pdf