百萤推荐:抗体标记试剂盒ReadiLink 系列
本周,百萤生物为大家推荐的是AAT Bioquest研发生产的ReadiLink 快速抗体标记试剂盒,该试剂盒提供了一种便捷的方法,可以用我们的iFluor 染料和mFluor 染料以及其他小型有机染料标记微量的抗体(50或100 µg)。用于荧光成像或流式细胞仪的荧光标记染料多达二十多种选择。还提供ReadiLink 快速抗体标记试剂盒,用于将生物素和半抗原载体BSA和KLH与生物分子偶联,用于免疫和抗体生产。
ReadiLink 快速抗体标记试剂盒的特点:
- -包括标记100 µg抗体的所有基本成分
- 方便 -简单的两步标记方案,无需要柱纯化
- 多功能 -标记的一抗和二抗以及蛋白质(> 10 kDa)的量为50至100 µg
- 可靠 -产生稳定结合荧光标记的抗体偶联物,用于下游基于荧光的成像或流式细胞仪应用
ReadiLink 快速抗体标记试剂盒的原理:
ReadiLink 快速抗体标记试剂盒利用与胺反应性部分(琥珀酰亚胺酯)偶联的荧光团。这些活性染料选择性结合形成羧酰胺键的蛋白质的脂族胺。这些羧酰胺键一旦形成,将非常稳定,从而确保标记物和蛋白质之间不会解离。偶联并添加TQ 染色的淬灭缓冲液后,任何游离的未结合ReadiLink 标记将与淬灭剂结合并变为非荧光。添加TQ 染色的淬灭缓冲液是关键,因为它 了背景干扰以及色谱柱纯化步骤。ReadiLink 抗体标记试剂盒包括进行两个结合反应(2 x 50 µg)的所有基本成分。每个试剂盒均可用于标记单克隆或多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kD)。
ReadiLink 快速抗体标记试剂盒推荐操作步骤(标记50μg蛋白): 将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。 1.准备蛋白质溶液(溶液A): 为了标记50g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将5L(总反应体积的10%)的反应缓冲液(组分B)与50L目标蛋白质溶液混合。 注1.如果您的蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使~50μg蛋白质可用于标记反应。 注2.为了标记100g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将10μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100μL目标蛋白质溶液混合。 注3.蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜,10 kDa(来自Millipore的cat#UFC501008)去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)。 注4.不纯抗体、牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的抗体不会被很好 记。 注5.如果蛋白质浓度小于1 mg / mL,则结合效率明显降低。为获得 标记效率,建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。
2.运行结合反应: 2.1 将蛋白质溶液(溶液A)加入一瓶标记染料(组分A)中,通过反复移液几次将其混合均匀,或将小瓶涡旋几秒钟。 注意:使用标记染料的两个小瓶(组分A)通过将100μg蛋白质分成2x50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。 2.2 将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。 注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。
3.停止共轭反应: 3.1 添加5 L(对于50μg蛋白质)或10L(对于100μg蛋白质),其为TQ染色猝灭缓冲液(组分C)的总反应体积的10%到缀合反应混合物中(来自步骤2.2),将它们混合均匀。 3.2 在室温下孵育10分钟。 3.3 标记的蛋白质(抗体)完成。 |
ReadiLink 快速抗体标记试剂盒选择指南:
产品名称 | 荧光团当量 | Ex/Em (nm) | 可用于成像 | 可用于流式 | 货号 |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 420 | Cascade® Blue | 398/411 | 是 | 1105 | |
ReadiLink iFluor 350抗体标记试剂盒 | AMCA, Alexa Fluor® 350 | 345/442 | 是 | 1220 | |
抗体标记试剂盒ReadiLink mFluor 450 | Pacific Blue® | 403/454 | 是 | 1100 | |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 510 | 414/508 | 是 | 1110 | ||
ReadiLink iFluor 488抗体标记试剂盒 | FITC, Alexa Fluor® 488 | 491/514 | 是 | 是 | 1255 |
ReadiLink FITC抗体标记试剂盒 | 494/520 | 是 | 是 | 1299 | |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 540 | Pacific Orange® | 405/537 | 是 | 1114 | |
ReadiLink Cy3抗体标记试剂盒 | 555/565 | 是 | 1290 | ||
ReadiLink iFluor 555抗体标记试剂盒 | Cy3, Alexa Fluor® 555 | 552/567 | 是 | 1227 | |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 570 | R-PE | 553/570 | 是 | 1120 | |
ReadiLink iFluor 594抗体标记试剂盒 | Texas Red®, Alexa Fluor® 594 | 592/614 | 是 | 1230 | |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 620 | 522/617 | 是 | 1123 | ||
ReadiLink iFluor 633抗体标记试剂盒 | Cy5, Alexa Fluor® 633 | 638/655 | 是 | 是 | 1260 |
ReadiLink Cy5抗体标记试剂盒 | 644/665 | 是 | 是 | 1292 | |
ReadiLink iFluor 647抗体标记试剂盒 | Cy5, Alexa Fluor® 647 | 654/674 | 是 | 是 | 1235 |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 700 | APC-Alexa Fluor® 700 Tandem | 657/700 | 是 | 1130 | |
ReadiLink iFluor 680抗体标记试剂盒 | Cy5.5, Alexa Fluor® 680, IRDye® 700 | 682/701 | 是 | 是 | 1240 |
ReadiLink iFluor 700蛋白标记试剂盒 | Alexa Fluor® 700 | 693/713 | 是 | 是 | 1245 |
ReadiLink Cy7抗体标记试剂盒 | 749/776 | 是 | 1294 | ||
ReadiLink iFluor 750抗体标记试剂盒 | Cy7, Alexa Fluor® 750 | 753/779 | 是 | 1250 | |
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 780 | APC-Alexa Fluor® 750 Tandem | 629/780 | 是 | 1131 | |
ReadiLink iFluor 790抗体标记试剂盒 | IRDye® 800, Alexa Fluor® 790 | 782/811 | 是 | 1265 |
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