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百萤推荐:抗体标记试剂盒ReadiLink 系列

English title: Biolite recommendationtide:ReadiLink Rapid Antibody Labeling Kits

本周,百萤生物为大家推荐的是AAT Bioquest研发生产的ReadiLink 快速抗体标记试剂盒,该试剂盒提供了一种便捷的方法,可以用我们的iFluor 染料mFluor 染料以及其他小型有机染料标记微量的抗体(50或100 µg)。用于荧光成像或流式细胞仪的荧光标记染料多达二十多种选择。还提供ReadiLink 快速抗体标记试剂盒,用于将生物素和半抗原载体BSAKLH与生物分子偶联,用于免疫和抗体生产。


ReadiLink 快速抗体标记试剂盒的特点:

  •  -包括标记100 µg抗体的所有基本成分
  • 方便 -简单的两步标记方案,无需要柱纯化
  • 多功能 -标记的一抗和二抗以及蛋白质(> 10 kDa)的量为50至100 µg
  • 可靠 -产生稳定结合荧光标记的抗体偶联物,用于下游基于荧光的成像或流式细胞仪应用

 

ReadiLink 快速抗体标记试剂盒的原理:

ReadiLink 快速抗体标记试剂盒利用与胺反应性部分(琥珀酰亚胺酯)偶联的荧光团。这些活性染料选择性结合形成羧酰胺键的蛋白质的脂族胺。这些羧酰胺键一旦形成,将非常稳定,从而确保标记物和蛋白质之间不会解离。偶联并添加TQ 染色的淬灭缓冲液后,任何游离的未结合ReadiLink 标记将与淬灭剂结合并变为非荧光。添加TQ 染色的淬灭缓冲液是关键,因为它 了背景干扰以及色谱柱纯化步骤。ReadiLink 抗体标记试剂盒包括进行两个结合反应(2 x 50 µg)的所有基本成分。每个试剂盒均可用于标记单克隆或多克隆抗体或其他蛋白质(> 10 kD)。


ReadiLink 快速抗体标记试剂盒推荐操作步骤(标记50μg蛋白)

将所有组分加热并在打开前将样品瓶短暂离心,并在开始结合前立即准备所需的溶液。 以下SOP是标记抗HDAC IgG抗体的实例。

1.准备蛋白质溶液(溶液A):

为了标记50g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将5L(总反应体积的10%)的反应缓冲液(组分B)与50L目标蛋白质溶液混合。

注1.如果您的蛋白质浓度不同,请相应调整蛋白质体积,使~50μg蛋白质可用于标记反应。

注2.为了标记100g蛋白质(假设目标蛋白质浓度为1mg / mL),将10μL(总反应体积的10%)反应缓冲液(组分B)与100μL目标蛋白质溶液混合。

注3.蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中,必须用1X PBS(pH 7.2-7.4)透析,或使用Amicon Ultra-0.5,Ultracel-10膜,10 kDa(来自Millipore的cat#UFC501008)去除用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(如硫酸铵和乙酸铵)。

注4.不纯抗体、牛血清白蛋白(BSA)或明胶稳定的抗体不会被很好 记。

注5.如果蛋白质浓度小于1 mg / mL,则结合效率明显降低。为获得 标记效率,建议 终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL。

 

2.运行结合反应:

2.1 将蛋白质溶液(溶液A)加入一瓶标记染料(组分A)中,通过反复移液几次将其混合均匀,或将小瓶涡旋几秒钟。

注意:使用标记染料的两个小瓶(组分A)通过将100μg蛋白质分成2x50μg蛋白质并使每个50μg蛋白质与一小瓶标记染料反应来标记100μg蛋白质。 将两个小瓶合并用于下一步。

2.2 将缀合反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意:如果需要,可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。

 

3.停止共轭反应:

3.1 添加5 L(对于50μg蛋白质)或10L(对于100μg蛋白质),其为TQ染色猝灭缓冲液(组分C)的总反应体积的10%到缀合反应混合物中(来自步骤2.2),将它们混合均匀。

3.2 在室温下孵育10分钟。

3.3 标记的蛋白质(抗体)完成。


ReadiLink 快速抗体标记试剂盒选择指南:

产品名称 荧光团当量 Ex/Em (nm) 可用于成像 可用于流式 货号
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 420 Cascade® Blue 398/411   1105
ReadiLink iFluor 350抗体标记试剂盒 AMCA, Alexa Fluor® 350 345/442   1220
抗体标记试剂盒ReadiLink mFluor 450 Pacific Blue® 403/454   1100
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 510   414/508   1110
ReadiLink iFluor 488抗体标记试剂盒 FITC, Alexa Fluor® 488 491/514 1255
ReadiLink FITC抗体标记试剂盒   494/520 1299
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 540 Pacific Orange® 405/537   1114
ReadiLink Cy3抗体标记试剂盒   555/565   1290
ReadiLink iFluor 555抗体标记试剂盒 Cy3, Alexa Fluor® 555 552/567   1227
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 570 R-PE 553/570   1120
ReadiLink iFluor 594抗体标记试剂盒 Texas Red®, Alexa Fluor® 594 592/614   1230
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 620   522/617   1123
ReadiLink iFluor 633抗体标记试剂盒 Cy5, Alexa Fluor® 633 638/655 1260
ReadiLink Cy5抗体标记试剂盒   644/665 1292
ReadiLink iFluor 647抗体标记试剂盒 Cy5, Alexa Fluor® 647 654/674 1235
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 700 APC-Alexa Fluor® 700 Tandem 657/700   1130
ReadiLink iFluor 680抗体标记试剂盒 Cy5.5, Alexa Fluor® 680, IRDye® 700 682/701 1240
ReadiLink iFluor 700蛋白标记试剂盒 Alexa Fluor® 700 693/713 1245
ReadiLink Cy7抗体标记试剂盒   749/776   1294
ReadiLink iFluor 750抗体标记试剂盒 Cy7, Alexa Fluor® 750 753/779   1250
抗体标记试剂盒 ReadiLink mFluor 780 APC-Alexa Fluor® 750 Tandem 629/780   1131
ReadiLink iFluor 790抗体标记试剂盒 IRDye® 800, Alexa Fluor® 790 782/811   1265

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