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实验常用仪器之酶标仪与分光光度计

在实验室我们经常会遇到需要检测样本的吸光度,而酶标仪与分光光度计就是用来帮助我们进行检测样本的利器。

酶标仪即酶联免疫检测仪(enzyme-labeled instrument)。是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。

 

分光光度计(spectrometer),又称光谱仪,是将成分复杂的光分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。

大家都知道酶标仪与分光光度计的测定原理都是使用朗伯比尔定律,那么它们有什么区别呢?


1、酶标仪和分光光度计的区别

(1)盛装待测溶液的容器:

分光光度计:比色皿(只起到盛装溶液的作用),每种比色皿只能盛装一种溶液。

酶标仪:酶标板(对抗原抗体有较强的吸附作用),材质为聚乙烯材料,每空可盛装不同溶液。

(2)光路的方向:

分光光度计:水平光路

酶标仪:垂直光路,因为酶标仪的微孔板都是多孔多排,光线只能垂直穿过,光线既可从上到下也可从下到上。特点,受液体浓缩或稀释的影响小。不足,受液面的水平性、透光性、孔底的平整等因素的影响比较大。

(3)光路的长度:

由于光密度(OD值)与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。

分光光度计:因为比色杯宽度,1cm,所以光路长度固定为1cm。特点:不同仪器,不同批次的测量数据有相同的可比性。

酶标仪:光路长度为液体液面的高度。特点:所测值受到样品体积影响。


2、酶标仪和分光光度计的优缺点比较

分光光度计:

优点:1、检测波长范围较宽;2、加样量不一致对测量结果没有影响。

缺点:1、工作量大,操作繁琐,耗时;2、耗试剂;3、结果稳定性差,重复性较差,误差较大;4、对于微量物质,难以检测到。

应用领域:药品检验、药物分析、环境检测、卫生防疫食品、化工、科研等领域对物质进行定性、定量分析。

酶标仪:

优点:1、一次性处理样品量大,省时;2、样本、试剂用量少;3、操作简单,重复性好,检测速度快、效率高。

缺点:1、酶标仪96孔板在紫外光区有较强的紫外吸收,应尽量避免在300nm以下使用酶标仪进行含量测定;2、必须确保微孔板每个孔加样量严格一致,对实验者的操作技能提出了更高的要求。

主要应用领域:临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学等。


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