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trFluor 链霉亲和素结合物:针对时间优化 分辨荧光分析

 

      AAT Bioquest的 trFluor 链霉亲和素缀合物通常与生物素化的二抗结合使用,作为间接免疫荧光染色的第二检测试剂。它们是利用TR-FRET平台进行生物素-链霉亲和素的生物学测定和测试非常有价值的工具(表1),trFluor 链霉亲和素偶联物由链霉亲和素组成,trFluor Eu或trFluor Tb共价附有时间分辨的红色荧光euro(Eu)标记或绿色荧光ter(Tb)标记(图1)。

 

trFluor 染料的主要特点:

1.无需添加氟化物或增强溶液。

2.有多种反应形式。

3.比其他TRF染料更容易与生物分子偶联,具有更高的偶联产率。

4.在〜350 nm处被普通光源最大程度地激发。

 

图1.使用trFluor 标记的链霉亲和素偶联物进行TR-FRET测定原理

 

图2 HeLa细胞的图像比较。 将HeLa细胞与(Tubulin +)或不与(Tubulin-)小鼠抗微管蛋白和生物素山羊抗小鼠IgG一起孵育,然后孵育FITC-Xtra链霉亲和素缀合物(Green,Left,Cat#135)或FITC-链霉亲和素缀合物(Green,Right, 将细胞核分别用Hoechst 33342(Blue,Cat#17530)染色。

图3将HL-60细胞与(红色,+)或不与(绿色,-)小鼠抗HLA-ABC(W6 / 32 mAb)和生物素山羊抗小鼠IgG一起孵育,然后与FITC-链霉亲和素缀合物(Cat#16910)。 使用ACEA NovoCyte流式细胞仪在FITC通道中监测荧光信号。 计算每种缀合物的染色指数(SI)。

表1.时间分辨发光探针的典型受体

trFluor 供体

推荐受体

trFluor Eu

iFluor 647, TF5, APC

trFluor Tb

iFluor 488, TF2, FITC

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