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CCK-8 常见问题详解(精)

 

今天百萤生物为您介绍CCK-8在使用中常见的问题

1:CCK的保存和稳定性如何?

答:CCK稳定性高,避光条件-20℃有效期2年,4℃有效期1年。经常使用建议4℃保存,避免反复冻融。CCK正常颜色为粉红色,若颜色发生明显偏差,质量可能有发生变化。

 

2:CCK的细胞毒性如何?

答:CCK毒性非常低,因此CCK检测完后相同的细胞还能用于其它细胞增殖检测如结晶紫染色法,中性红染色法或DNA荧光染色法。

 

3:CCK会对活细胞进行染色吗?

答:不会,首先WST-8不会进入细胞染色,整个显色反应都是在培养体系中进行的。另外WST和WST-8甲臜都属于高度水溶性组分,反应结束更换新的培养液,即可清除外源组分。

 

4:做细胞活性检测时,每孔应该接种多少个细胞?

答:当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000个/孔(100 μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100 μL培养基)。

 

5:若是使用6孔或者24孔板进行试验,CCK试剂使用量怎么样呢?

答:如果要使用6孔板或24孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

 

6:能否用384孔板进行细胞增殖与活性检测的实验呢?

答:可以,CCK-8产品的使用量为每孔培养基总体积的10%。建议先将CCK-8产品稀释一倍,然后加入培养基总体积的20%即可,这样可减少误差。

 

7:培养基的本底颜色如酚红会不会影响细胞活性的检测呢?

答:不会的,培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光值而消去,因此不会对检测造成影响。

 

8:在加入CCK-8时可否不更换培养基?

答:一般情况下可以不更换培养基。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话,有可能会产生误差,必须更换其它培养基。

 

9:只可以在450 nm波长处测OD值吗?

答:可以在450 nm波长处测OD值,但是若无此波长的滤光片,可选择吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。

 

10:若是暂不检测OD值,该如何处理?

:若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1 M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化

 

11:在实验中OD值太高,怎么解决?

答:可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如:可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。此外,可适当减少细胞的数量。

 

12:如果OD值太低,怎么解决?

答:可以采取2个办法:1、适当增加细胞数量  2、延长加入CCK-8试剂后的反应时间。

 

13:应该每次做标准曲线吗?

答:建议每次做。虽然细胞是一样的,但是细胞的状态不一定一样。对于状态不一样的细胞,建议每次做标准曲线。

 

14:在cck-8显色过程中,如何终止反应

:有以下几种方法(96孔板):1.在显色反应后,将培养板放置4°冰箱内;2.每孔加入10ul 0.1M HCL溶液。 3.每孔加入10ul 1%(w/v)的SDS溶液。注:反应停止后,应在24h内测定

 

15:如何减少由于CCK-8试剂在孔壁上的残留所带来的误差

答:可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样

 

16.好用的 CCK-8 试剂盒推荐?

:百萤生物生产的 Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞活力检测试剂盒已广泛用于生物活性因子的活性检测,抗肿瘤药物的筛选,细胞增殖的测定,细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增殖相关的实验

 

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