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D-荧光素钾盐及D-荧光素使用中的常见问题

 

今天百萤生物为您介绍D-荧光素使用中的常见问题

1、D-荧光素适合做哪些实验? 

D-荧光素钾盐和5-氟-荧光素,作为Luciferase的作用底物,常用于以下实验:

  1. 报告基因分析
  2. In vivo imaging (动物活体成像)
  3. In vitro imaging (细胞体外分析)
  4. ATP测定
  5. 其它luciferase及其基因相关的分析和研究工作

 

2、D-荧光素应用于活体成像的基本原理 

细胞中D-荧光素酶参与的化学发光反应遵守酶促反应的基本原理,在底物D-荧光素钾过量的情况下,反应产生的光子数(发光量)与细胞中的D-荧光素酶的量成正相关,从而可以推算出细胞的数量。

 

3、D-荧光素钾盐溶液的稳定性 

D-荧光素钾盐易溶于水和缓冲液,溶解度可高达25mg/mL。一般使用浓度为3-15 mg/mL。

溶液的pH值、溶液中的氧气和保存时间对其保存过程中的稳定性非常重要。当溶液的pH<6.5(发生水解作用)或>7.5(发生消旋化作用,D型转化为L型)的情况下,D-荧光素钾盐相对不稳定。如果溶液中存在少量的氧气,将加速D-荧光素钾的降解速度。

D-荧光素配成溶液后,在最佳的保存条件(-80°C,最佳pH,无氧气)下,存在固定的降解速度:0.2%/天,因此配成溶液保存的D-荧光素应尽量在1年内使用完。

有水存在的情况下,主要发生消旋化作用,即D-荧光素转化成L-荧光素,有报道称L-荧光素对荧光素酶催化的酶促反应有抑制作用。

 

4、D-荧光素、D-荧光素钠和D-荧光素钾之间的区别 

主要区别在于溶解和分散性能。D-荧光素钾盐在水和缓冲液中的溶解度高,且溶解速度较快,故在一般的生物学试验中常用D-荧光素钾盐 

 

5、D-荧光素钾盐的保存和运输条件  

保存条件:≤-20°C,避光,保持干燥。(在不打开包装的条件下,可保存两年时间)。

运输条件:高纯度的D-荧光素钾盐可在短时间内常温条件下保存,运输条件为常温。

原装(没有打开包装)荧光素的包装瓶中充有氩气,保证其稳定性,打开包装后,请严格按照保存条件保存。

D-荧光素钾盐具有易溶于水的特性,其暴露于空气中,易吸潮。在称量过程中,请考虑其易吸潮的特性,先进行温度平衡,再快速称取。 

 

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