百萤问号：钙离子荧光探针常见问题解答

1.丙磺舒（probenecid）被报道会影响钙离子通道，比如干扰环核苷酸门控通道，有没有可以不用该试剂的钙离子探针？

回答：

丙磺舒（probenecid），是一种阳离子转运体抑制剂，用来降低探针进入胞内后被排除的几率，以提高胞内信号。常见的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要丙磺舒，否则信号会很低。您可以选择Calbryte系列，该系列无需丙磺舒（probenecid）仍会有很好的信号，降低干扰，是不含丙磺舒（probenecid）产品的佳选择。

图示：在存在丙磺舒（左）和不存在（右）的情况下进行Ca²⁺检测测定，并使用Ex / Em = 540/590的FlexStation3测量了截止波长为570 nm的响应。

2.没有动态读数功能或者没有自加样功能的酶标仪还能做钙流检测吗？

回答：

可以。钙流检测的仪器常见的有FlexStation, FLIPR等，可以连续读数并带有自加样系统，这样就可以在秒的时间范围内捕捉到更完整的钙离子浓度变化。但如果实验室实在用不到这样的机器，可以考虑Cell Meter 钙检测免洗和免丙磺舒检测试剂盒 (Cat# 36312)，使用普通的底读酶标仪就可以了。该试剂盒使用了Fluo-8E AM探针，一旦与钙离子结合，信号增>100倍，能够使信号维持1-2min左右，给我们自己手动加样争取时间。

3.流式检测钙离子因为要取下管子加刺激剂，容易错过高峰，有没有办法？

回答：

我们有流式检测钙离子试剂盒，Cat#36310，Cell Meter 钙测定流式细胞分析试剂盒，也可以选择Fluo-8H AM探针，因Kd比较小，可以使信号保留的时间久一些。

4.有检测植物细胞的钙离子探针吗？

回答：

有的。常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都适用于植物细胞，Fluo-4常用，若要获得更好的信噪比，推荐其升级版本 Calbryte 520 AM。

5.内质网（ER）或者线粒体内的钙离子浓度变化，分别使用什么探针？

回答：

ER钙离子检测可使用Kd 较高的Rhod-5N, AM (Cat# 21070). 线粒体钙离子检测可使用 Rhod-2 AM (Cat# 21064)。Rhod-2 在低浓度时特异识别线粒体。

6.血液等体液的里的钙离子浓度用什么检测方法？

回答：

人体血液里钙离子的浓度大约在19 -10.5 mg/dL范围内。血液里钙离子浓度过低或者过高可引起低钙血症和高钙血症 。 Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒（Cat#36360）可用于定量体液的钙离子浓度，可使用96孔或者384孔板经酶标仪读取数值。不需样本分离直接检测，30min可完成，低检测0.03mM的钙离子。

7.荧光探针的AM、Dextran葡聚糖形式有什么区别？

回答：

AM 形式通过孵育即可便捷进入细胞内。若检测孵育时间久容易发生区室化，比如钻进了内质网等亚器官内。 Dextran大的优势就是降低了区室化作用，但是需要微量注射或其他方式进入细胞内。

8.我们需要高通量检测，选择什么产品？

回答：下列产品免洗，无需去除培养基，加入染料孵育，直接加刺激剂即可检测。适用于高通量。