百萤问号:DNA检测的相关问题解答
百萤对近客户们关于DNA检测时提到的问题进行了总结归纳,希望可以给大家带来一些小的帮助。
1.末端转移酶(TdT)是否可以标记DNA的3'和5'末端?
答:末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)只能标记DNA的3'末端。在3'OH突出端添加dNTPs比在3'OH凹或钝(平)端添加dNTPs更有效。 |
2.是否有与DNA和RNA相互作用的双荧光核酸染料?
羟芪巴脒,#17514,是一种荧光染料,当与DNA(Ex / Em = 360 / 590nm)和RNA(Ex / Em = 360/540 nm)结合时,会发出截然不同的荧光发射曲线。 吖啶橙,#17502,是可以透过细胞的阳离子染料,可通过嵌入或静电吸引作用与DNA(Ex / Em = 502/525 nm)和RNA(Ex / Em = 460/650 nm)相互作用。 |
3.如何确定DNA纯度?
答:可以通过测量260和280 nm处的样品吸光度并确定它们的比率来确定样品中的DNA纯度,其中1.7–2.0的比率表示纯DNA样品。在260和280 nm处吸收的污染物可能会导致样品中的DNA被高估。 |
4.线粒体DNA(mtDNA)与核DNA有何不同?
答:mtDNA是线粒体DNA,在许多特征上与核DNA不同(见表1)。 表1.mtDNA和核DNA之间的差异
|
5.如何计算DNA浓度?
答:可以通过在分光光度计中测量样品在260nm处的吸光度并使用比尔-朗伯定律计算浓度来确定DNA浓度。为此,您需要确定以cm -1 M -1为单位的DNA的消光系数。 不同核酸碱基的平均消光系数: ds DNA:Ec = 6600 cm -1 M -1,MW = 330 单链DNA:Ec = 8919 cm -1 M -1,MW = 330 RNA:Ec = 8250 cm -1 M -1,MW = 340
计算DNA浓度的方法: 双链DNA:50 μg/ml OD = 1; CON(μg/mL)=Abs.x 50 μg/ml SS DNA:50 μg/ml OD = 1.35; CON(μg/mL)=(Abs./1.35)x 50 μg/ml RNA:50 μg/ml OD = 1.21; CON(μg/mlL=(Abs./1.21)×50 μg/ml 使用AAT Bioquest的DNA浓度计算器,通过260 nm处的吸光度读数确定DNA溶液的浓度。可以通过输入核酸序列来计算任何核苷酸的浓度。 |
6.核红 LCS1(Cat#17542)是否可以固定?
答:是的,您可以使用Nuclear Red LCS1染色活细胞中的DNA,然后固定您的细胞。 |
7.除了溴化乙锭(EBr),琼脂糖凝胶中的核酸染色还有哪些其他选择?
答:Cyber Green (Cat#17590)(Cat#TJ1700)和Cyber Orange (Cat#17595)是出色的核酸凝胶染料,在琼脂糖凝胶中检测DNA时,其灵敏度比EBr敏感,并且诱变性明显低于EBr。 Cyber Green 可用于qPCR,熔解曲线分析,嗜热解旋酶=依赖性扩增(tHDA)的实时监测,常规溶液DNA定量和各种凝胶电泳。稀释后的Cyber Green 浸泡的凝胶无需脱盐即可看到。 当对凝胶中的寡核苷酸染色时,我们建议在EBr上使用Gelite 绿色核酸凝胶染色试剂盒(Cat#17589)。Gelite Green的EBr灵敏度高两个数量级,每条带可检测低至60 pg dsDNA。 还有TJ系列核酸凝胶染料,它们是SYBR®Green、SYBR®gold等产品的佳替代品,它们便宜实用,荧光强度、灵敏度却丝毫不输进口产品,是常做核酸凝胶实验的佳选择。 |
8.PCR的四个步骤是什么?
答:PCR包括以下四个步骤:
|
9.dsDNA和ssDNA有什么区别?
答:dsDNA是双链DNA,而ssDNA是单链DNA,尽管它们两者都携带遗传物质,但它们有许多差异(见表2)。 表2. dsDNA和ssDNA之间的差异
|
10.PCR有哪些不同类型?
答: PCR的类型很多:
|
11.DNA提取的步骤是什么?
答:DNA提取涉及3个基本步骤,即裂解、沉淀和纯化。 1.在裂解中,细胞核和细胞破裂,从而释放出DNA。这个过程涉及机械破坏,并使用诸如蛋白酶K之类的酶溶解细胞蛋白和游离DNA。 2.另一个步骤称为沉淀,将释放的DNA与细胞碎片分离。它涉及使用钠(Na+)离子中和DNA分子中的任何负电荷,使它们的水溶性降低,更稳定。然后加入酒精(例如异丙醇或乙醇),由于其不溶于酒精,导致DNA从水溶液中沉淀出来。 3.从水溶液中分离出DNA后,再用乙醇冲洗,这一过程称为纯化。纯化去除所有剩余的细胞碎片和不需要的物质。DNA完全纯化后,通常会再次溶解在水中,以方便存储和处理。 |
12.HeLa细胞中的总DNA含量是多少?
答:对于HeLa细胞,每个HeLa细胞的总DNA含量约为15 pg。 |
13.PCR扩增需要什么材料?
答: 使用PCR扩增DNA所需的材料是:
|
百萤生物是美国AAT Bioquest中国区域代理商,为您提供AAT Bioquest优质的产品、详尽的技术和前沿的资讯,欢迎来电咨询!
- 订购电话:029-68064558
- 邮箱:xiaodong@tjbiolite.com;info@tjbiolite.com
- QQ:1485814040
- 微信公众号:百萤生物
- 新浪微博:百萤生物-
- 百度贴吧:百萤生物吧
- 丁香通:西安百萤生物科技有限公司
- 生物在线:西安百萤生物科技有限公司
- 搜好货:西安百萤生物科技有限公司
- 爱采购:西安百萤生物科技有限公司