百萤课堂：低丰度靶标染色神器——TSA与PSA

今天，百萤为大家带来的是用于细胞和组织中低丰度靶标的高分辨率成像技术。TSA/PSA是一种成熟的细胞信号放大技术，当TSA/PSA与我们光稳定性、水溶性的iFluor染料结合后，产生的荧光信号具有比传统免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光方法产生的信号更高的度和灵敏度。PSA是美国AAT Bioquest自主研发的与TSA功能类似的信号放大方法，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。感兴趣的朋友一起来看看吧！

限时促销预告：所有包含细胞信号放大的TSA酪胺试剂均七折出售,购买即送CCK-8/核酸/转染试剂自选小样一支；活动时间，2020.7.1-2020.7.31；活动限终端用户。

TSA/PSA原理

酪胺信号放大（TSA）是一种基于辣根过氧化酶（HRP）的催化活性对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。原理为酪胺Tyramide的过氧化物酶反应（已标记荧光的酪胺在HRP催化H₂O₂下形成共价键结合位点）产生的大量酶促产物与目标蛋白的酪氨酸残基共价结合，从而使目标蛋白标记上特异的荧光或生物素。

图1.TSA/PSA原理及工作流程图。通过类似于传统ICC和IHC方法的工作流程，TSA/PSA试剂可以通过几个简单的步骤实现对所需目标的灵敏检测。

表1.TSA/PSA技术与传统免疫荧光对比

TSA/PSA特点

实验结果展示

图2.分别用iFluor 488 PSA和Alexa Fluor 488 TSA染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用polyHRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育，后使用iFluor 488 PSA （Cat#45020）和Alexa Fluor 488 TSA分别染色。图像显示iFluor 488 PSA与Alexa Fluor 488 TSA相比提高了荧光IHC的灵敏度。

图3.分别用iFluor 488 酪胺和Alexa Fluor 488 酪胺染色甲醛固定的石蜡包埋人肺腺癌阳性组织的染色结果图。人肺腺癌阳性组织切片用兔抗EpCam抗体染色，然后用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗孵育。显影：iFluor 488 酪胺（左）；Alexa Fluor 488 酪胺（右）。核染色：DAPI

图4.Styramide 超级信号放大试剂盒的信号强度对比。 （A）将HeLa细胞固定，透化并用各种浓度的兔抗微管蛋白一抗标记，建议的稀释浓度为：1：500。 然后将细胞直接与AlexaFluor488缀合的山羊抗兔IgG二抗染色，后分别与HRP标记的山羊抗兔IgG二抗、AlexaFluor 488酪胺和iFluor 488 Styramide（#45205）染色。 使用FITC滤光片组拍摄荧光图像，并以相同的曝光时间进行分析。 （B）测量相对荧光信号强度，并比较不同检测方法之间的强度。

相关产品推荐