用于GPCR和钙离子通道功能分析的一系列钙指示剂（三）

今天百萤给大家介绍一下AAT Bioquest除绿色钙离子荧光探针之外的其他钙离子荧光探针。除绿色荧光外，AAT Bioquest出售的钙离子荧光探针还有哪些？它们的性能如何？它们适用于哪些实验？适用于哪些仪器？一起来看看吧！

AAT Bioquest出售的其他钙离子荧光探针

Calbryte -590, AM

Calbryte 590 是对橙红色荧光指示剂（例如Calcium Orange 和Rhod-2）的升级版。该染料在580 nm处具有大激发，并被555 nm激光线充分激发。它的大发射波长为592 nm，与TRITC / Cy3滤光片组兼容。在相同的条件下，Calbryte 590对钙的敏感性是Rhod-2的十倍左右。此外，与主要位于线粒体中的Rhod-2不同，Calbryte 590可以很好地保留在细胞的细胞质中。 

Calbryte-590的产品特点：

1.与GFP兼容的红移钙指示剂
2.Calcium Orange和Rhod-2的优质替代品
3.灵敏度是Rhod-2的十倍
4.与细胞中的Rhod-2和Cal-590相比，大大提高了信噪比
5.明显增强细胞内保留
6.细胞质定位

图1.用Calbryte 590和Rhod-2在不含丙磺舒的情况下，检测CHO-K1细胞中的内源性P2Y受体。

Calbryte -630, AM

Calbryte 630 是我们对红色和深红色荧光指示剂（例如X-Rhod-1）的升级版。这种染料的大激发波长为608 nm，该染料的大发射波长为624 nm，并且与常见的Texas Red滤光片组兼容。由于它与光谱的绿色区域相距较远，因此Calbryte 630非常适合与绿色荧光标记探针（例如  iFluor 488，  Alexa Fluor 488或GFP） 进行多路复用。此外，Calbryte 630的长发射波长使其非常适合研究深部组织。这是因为较长波长的染料更容易穿透许多细胞层，而短波长的染料则不能。 

Calbryte 630 AM的产品特点：

1.与GFP兼容的红移钙指示剂
2.X-Rhod-1和Cal 630的替代品
3.明显增强的细胞内保留
4.非常适合与绿色荧光标记（例如iFluor 488，Alexa Fluor 488或GFP）复用

Rhod-4

Rhod-4是我们针对Rhod-2的缺点研发出来的升级产品。Rhod-4 除可以激发514 nm，532 nm和546 nm之外，还可以用488 nm的氩离子激发光很好地激发。Rhod-4 的主要特征是细胞质定位，长多波长激发和大于100倍的荧光增强（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标，尤其是当化合物具有强荧光时并且应用程序需要GFP。我们的Rhod-4 AM在细胞中的亮度比Rhod-2 AM高4倍以上。这一特性使Rhod-4 对于HTS应用的效果更好。

Rhod-4产品特点：

1. 细胞质定位：Rhod-4 AM主要定位在细胞质中，而Rhod-2 AM主要定位在线粒体中。
2. 多种激发选项：〜490 nm，514 nm，532 nm和546 nm;
3. 更高的荧光强度：比Rhod-2 AM好10倍；
4. 更高荧光信号：在Ex 530 nm / Em 570 nm处，比Rhod-2 AM亮度高4倍。 

图3.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测定了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）在室温下将细胞与100 µL染料上载溶液孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25µL /孔）以达到终指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 µM。

图4.使用Rhod-4 AM（Cat＃21120）和Rhod-2 AM（Cat＃21064）在CHO-K1细胞中测量了ATP刺激的内源性P2Y受体钙反应。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar 黑色96孔板中过夜接种。 除去生长培养基，并用Rhod-4 AM（4 µM，A和B）或Rhod-2 AM（4 µM，C和D）将100 µL染料加载溶液在室温下孵育细胞1小时。 用200 µL HHBS代替染色液，然后在ATP处理之前（A和C）和之后（B和D）使用TRITC通道通过荧光显微镜（Olympus IX71）对细胞成像。

Cal Red R525 / 650 AM

Cal Red R525 / 650是一种用于新型的488 nm可激发比例的荧光钙指示剂。当进入细胞前，Cal Red R525 / 650的荧光很弱，一旦进入细胞，亲脂性AM阻断基团就会被细胞内酯酶裂解，导致带负电荷的荧光染料很好地保留在细胞中，激发波长接近488 nm，并且在525 nm和650 nm处有两次发射。当用生物活性化合物刺激细胞时，该受体会引发细胞内钙的释放，该钙被Cal Red R525 / 650螯合。当在488 nm激发时，发射信号在525 nm处增加，在650 nm处降低。Cal Red R525 / 650的激发和发射波长与普通滤光片组兼容，对细胞的损害小，使其成为评估和筛选GPCR激动剂和拮抗剂以及钙通道靶标的强大工具。

Fura-8 , AM/Fura-10 , AM

AAT Bioquest研发的Fura-8 ，为了进一步Fura-2的钙离子反应时出现的一些缺陷。Fura-8的发射光线移到了更长的可见光波长，与普通滤光片兼容。它具有与Fura-2相当的钙亲和力。与Fura-2 AM相比，Fura-8 AM对钙的敏感性更高，信号/背景比更高。Fura-10 , AM，的研发是为了让荧光信号更好的保留在细胞内，是Fura-8的升级产品，在没有丙磺舒的情况下，Fura 10表现出信号/背景比的比Fura-8要强上许多。

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