TUNEL检测

在细胞凋亡的后期阶段，半胱天冬酶的核酸内切酶将基因组 DNA 切割成寡核小体片段（约 180-200 个碱基对长）。使用 TUNEL 检测，这些断裂的暴露 3'-OH 末端可以用修饰的 dUTP 进行标记，以便随后对原位凋亡细胞进行可视化和量化。这通常是直接使用染料修饰的 dUTP 或间接使用BrdUTP和针对 BrdUTP 的抗体缀合物来完成的。使用怎样的标记方式，都需要酶末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 来催化修饰的 dUTP 掺入 3'-OH 末端。

图1. TUNEL工作原理

活细胞TUNEL检测

传统上，TUNEL检测需要样品的固定和透化，以促进外源性 TdT 的进入并确保成功标记 DNA 。我们的Cell Meter 活细胞 TUNEL 细胞凋亡检测是鉴定 DNA 片段化，无需酶 TdT 及其使用时的额外处理。这些检测利用专有的透膜荧光染料被动进入活细胞并选择性靶向细胞凋亡过程中形成的 DNA 切口。然后可以通过荧光显微镜、流式细胞术或基于荧光的微孔板检测直接观察荧光标记的 DNA 片段。 

对照

SS 100 nM

SS 1 µM

图2. 与未处理的对照相比，用 100 nM 或 1 µM 星形孢菌素 (SS) 处理 4 小时后 HeLa 细胞中 TUNEL 反应的荧光图像。

表1：用于活细胞的TUNEL 检测试剂盒

用于固定细胞和组织样品的 TUNEL 检测

Cell Meter 固定细胞和组织 TUNEL 检测遵循传统的 TUNEL 方法，并针对固定细胞和组织切片中的原位凋亡检测进行了优化。这些检测通过使用 TdT 催化染料修饰的 dUTP 并掺入片段化 DNA 的 3'-OH 末端中，直接识别群体内的凋亡细胞。然后可以分别使用荧光显微镜或流式细胞术对荧光标记的 DNA 片段进行可视化或定量。 

No DNase

DNase

图3. 使用 Cell Meter 固定细胞和组织 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒*绿色荧光*对福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 人肺腺癌切片进行 TUNEL 检测。

表2：用于固定细胞和组织的 Cell Meter TUNEL 检测试剂盒