7-Deaza-7-Propargylamino-3'-azidomethyl-dATP

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7-Deaza-7-Propargylamino-3'-azidomethyl-dATP是制备下一代测序（NGS）用荧光标记偶联物的关键结构单元。NGS采用的链终止法与早期Sanger测序原理相似，但其通过荧光标记的核苷酸类似物作为扩增反应的可逆终止剂来实现。与Sanger测序使用ddNTPs实现不可逆DNA聚合阻断不同，NGS的核心特征在于其DNA聚合阻断是可逆的。另一显著区别在于，NGS通过桥式PCR进行体外克隆扩增以增加待测分子数量——该平台将DNA片段连接至固相载体上的固定化引物，通过原位扩增形成由相同分子构成的DNA簇集。

在每个测序循环中，四种可逆终止核苷酸被同步加入，由聚合酶根据互补原则进行掺入。这些核苷酸通过3'-OH被3'-O-叠氮甲基取代而实现化学封闭，确保每个循环仅掺入单个核苷酸。当核苷酸掺入时，不同碱基会通过不同荧光通道产生信号。进入下一循环前，未掺入的核苷酸会被清洗去除，3'端的化学封闭则通过TCEP试剂解除。荧光信号采集完成后，新循环随即启动，如此周而复始直至完成所有片段测序。

综上所述，NGS测序反应包含三个核心步骤：核苷酸添加、荧光成像以及通过裂解荧光基团恢复3'-OH活性。