Amplite 荧光法铅离子定量试剂盒

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适用范围

用于检测铅离子

 

产品介绍

铅是一种对人体（尤其是儿童）具有高度毒性的重金属。铅会干扰细胞信号传导和基因表达，对大脑、肝脏、肾脏造成严重损害，甚至导致死亡。由于其在采矿冶炼中的悠久历史，以及在电池、涂料和汽油中的广泛使用，土壤和地下水中的铅污染已成为最严峻的环境问题之一。

Amplite®荧光法铅（II）离子定量检测试剂盒提供了一种可靠的溶液铅离子检测方案。该试剂盒采用Lead Green™荧光探针——一种选择性好、灵敏度高的绿色荧光探针，可通过荧光酶标仪（激发/发射波长=490/530 nm）便捷检测。本试剂盒支持96孔板或384孔板检测模式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作，30分钟内即可完成检测，最低可检测至4μM的铅（II）离子浓度。

铅离子检测样品分析方案

概述

1.准备并添加铅标准品或测试样品（50 µL）

2.准备并添加Lead Green工作溶液（50 µL）

3.在室温下孵育10-30分钟

4.检测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

 

溶液配制 

（注：所有未使用的储备液应分装为单次用量，配制后于-20°C保存，避免反复冻融）

储备溶液配制

Lead Green储备溶液（200X）

向Lead Green（组分A）瓶中加入50 μL DMSO（组分D），混匀配成200X储备液。
注意：未使用的储备液需分装保存于-20°C避光。

 

标准溶液配制

1 mM母液：将10 μL 100 mM铅标准液（组分C）加入990 μL超纯水

系列稀释：用超纯水对1 mM母液进行1:3梯度稀释，获得0-1 mM浓度梯度

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/19007

 

工作溶液配制

Lead Green工作溶液

将25 µLLead Green储备溶液（200X）加入5 mL的测定缓冲液（组分B），使总体积为5.025 mL。

注意：需避光保存并立即使用

 

操作步骤

表1.黑色96孔板中铅标准品和测试样品的布局。 LS =铅标准品（LS1-LS7，1.34至1000 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
LS1	LS1	...	...
LS2	LS2	...	...
LS3	LS3
LS4	LS4
LS5	LS5
LS6	LS6
LS7	LS7

 

表2.每个孔的试剂组成。

Well	Volume	Reagent
LS1-LS7	50 µL	serial dilution (1.34 to 1000 µM)
BL	50 µL	H2O
TS	50 µL	test sample

1. 根据表1和2中提供的信息，准备铅标准品（LS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
2. 在铅标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL Lead Green工作溶液，以使铅总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL工作溶液添加到每个孔中，而不是总体积为50 µL /孔。
3. 在避光条件下，室温下孵育反应10至30分钟。
4. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/530 nm处检测荧光强度。