Live or Dead 酵母 CFDA-AM/碘化丙啶活力试剂盒
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适用范围
酵母活力检测
产品介绍
Live or Dead™ 酵母 CFDA-AM/碘化丙啶活力检测试剂盒提供了一种便捷的酵母活力检测方法。该试剂盒使用 CFDA-AM 和 碘化丙啶 两种染料。
CFDA-AM 是一种细胞渗透性酯酶底物。其乙酰氧甲基酯（AM）基团使CFDA能够穿透细胞膜。进入细胞后，其疏水性阻断基团和二乙酸酯基团会被细胞内的酯酶水解，从而产生绿色荧光。
与之相反，碘化丙啶 仅能对细胞膜受损的酵母进行染色，产生红色荧光。
样品分析方案
概述
准备酵母样品
添加 1 µL CFDA-AM 染料工作溶液
添加 2 µL 碘化丙啶染料
轻轻涡旋，在 37°C 下孵育 15-30 分钟
使用 530/30 nm 和 576/26 nm 滤光片通过流式细胞仪进行分析
注：在打开小瓶之前，让组分升温至室温。碘化丙啶易与核酸结合，应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。处理 DMSO 原液时应特别小心，因为已知 DMSO 有助于有机分子进入组织。
溶液配制
CFDA-AM染料工作液
1.将 100 μL 的 DMSO 添加到 CFDA-AM（组分 A）的小瓶中，涡旋混合。
注意 在 -20°C 中以一次性等分试样储存原液。避免反复冻融。
操作步骤
以下方案仅用作为参考使用，具体请根据自己的实验进行调整
1.以~ 106个细胞/ mL的浓度制备含1mL悬浮液的酵母样品。
2.在每管实验样品中加入 1 μL CFDA-AM 染料工作溶液和 2 μL 碘化丙啶（组分 B）。对于未染色的对照，将 1 组试管放在一边，不添加染料。对于单色 CFDA-AM 对照，将 1 μL CFDA-AM 添加到一管未经处理的细胞和一管死亡细胞中。对于单色碘化丙啶对照，将 1 μL 碘化丙啶添加到一管未经处理的细胞和一管死细胞中。
请注意，根据您的具体应用，可能需要调整两种染料的比例以获得理想的响应。
3.轻轻涡旋每个管。然后将所有样品在室温下孵育 15 至 30 分钟，避光。
4.使用配备 488 nm 激光、530/30 nm 过滤器和 575/26 nm 过滤器（FITC 和 PE 通道）的流式细胞仪检测荧光。
注意 要使用荧光显微镜分析样品，请在载玻片和盖玻片之间捕获 5 µL 染色酵母悬浮液。使用 FITC 和 Cy3 滤光片组在显微镜下观察。
