Portelite 快速荧光法内毒素检测试剂盒

产品货期

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产品优势

灵敏度高

 

适用范围

用于内毒素检测

 

产品介绍

脂多糖（LPS）又称内毒素，是革兰氏阴性菌外膜的主要组成成分。作为脊椎动物先天免疫系统的强效激活剂，LPS可引发发热、脓毒症休克甚至死亡。它也被视为检测细菌病原体入侵的生物标志物，并在极端情况下导致炎症反应和内毒性休克的发生。在生物制品（如蛋白质、多肽或抗体样品）中检测LPS是生物制造和生物工艺中的关键任务。

Portelite™ 快速荧光内毒素检测试剂盒采用高灵敏度荧光底物Endotoxin Green™。该底物可在内毒素和鲎试剂（Limulus Amebocyte Lysate, LAL，一种从鲎血细胞中提取的试剂）存在下发生水解，产生强绿色荧光。内毒素活性与Endotoxin Green™水解产生的荧光强度成正比。该试剂盒专为Cytocite™和Qubit™荧光仪优化，可检测样品中宽范围的内毒素（1 EU/ml至0.002 EU/ml）。

重要提示：

本试剂盒不提供鲎试剂（LAL），但检测过程中必须使用。为实现好的效果，推荐使用Charles River的Kinetic Turbidimetric LAL Reagent （货号R19000-KTA2 / LVR190000）。更多产品信息请参见：Charles River LAL Reagents。

 

样品分析方案

概述

制备细胞裂解液（LAL）工作溶液

添加大肠杆菌内毒素标准品和测试样品（50µL）

添加LAL工作溶液（50µL）

在37°C下孵育30分钟

准备并添加Endotoxin Green工作溶液（100µL）

用CytoCite监测荧光

 

重要提示

实验前需将所有试剂盒组分恢复至室温，开盖前短暂离心试剂瓶。

实验所用材料均需无内毒素污染，包括：一次性试管、1.5 mL微量离心管、移液器吸头等。

有实验器皿必须清洁以确保内毒素检测准确性。

 

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，于-20°C保存并避免反复冻融。

Endotoxin Green储备液

试剂盒#60008：向Endotoxin Green™（组分A）瓶中加入50 µL DMSO配制底物储备液

试剂盒#60009：向Endotoxin Green™（组分A）瓶中加入500 µL DMSO配制底物储备液

注：避光保存

 

LAL储备液

LAL不提供，需从Charles River购买（Cat# R19000-KTA2）。

用2.5 mL无内毒素水完全溶解粉末，分装后于-80°C保存。

注：避免反复冻融；试剂盒#60008需500 µL储备液，#60009需2.5 mL；所有操作需在无菌环境中使用无菌器材完成

 

标准溶液配制

使用连续稀释计划工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/60008

 

 大肠杆菌内毒素标准溶液

将10 µL 100 EU/mL标准品加入990 µL无内毒素水（组分B）配成1 EU/mL溶液，再用无内毒素水进行1:3梯度稀释，获得1至0.001 EU/mL系列标准品

 

工作溶液配制

Endotoxin Green工作溶液

试剂盒#60008：将50 µL储备液加入5 mL无内毒素水（组分B）配成5.05 mL工作液

试剂盒#60009：将500 µL储备液加入50 mL无内毒素水配成50.5 mL工作液

注：每测试需100 µL，现用现配；避光保存；使用无内毒素容器分装

 

LAL工作溶液

试剂盒#60008：将500 µL储备液加入2 mL无内毒素水配成2.5 mL工作液

试剂盒#60009：将2.5 mL储备液加入10 mL无内毒素水配成12.5 mL工作液

注：每测试需50 µL，现用现配；避光保存；使用无内毒素容器分装

 

操作步骤

1.在0.2 mL PCR管（Cat#CCT100）中分别准备大肠杆菌内毒素标准液、空白对照或待测样品（各 50 μL）。

2.向每管大肠杆菌内毒素标准品、空白对照品和测试样品中加入50µL鲎红细胞裂解液工作溶液。

3.充分混合并在37°C下孵育30分钟。

4.添加100µLEndotoxin Green 每管内毒素标准品、空白对照品和测试样品的工作溶液，使总分析体积为200µL/孔。

5.将样本放入CytoCite 并用绿色荧光通道监测荧光。

CytoCite的程序详细说明，请参见下面的链接：https://devices.aatbio.com/documentation/user-manual-for-cytocite-fluorometer.

注：为获得好的结果，在添加工作溶液后2至10分钟内读取。

注：可加入50µL 25%乙酸以终止反应。