ReadiPrep 线粒体/细胞质分离试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
咨询
产品介绍
ReadiPrep™ 线粒体/细胞质分离试剂盒提供了一种便捷的方法，用于从哺乳动物细胞或组织中分离线粒体与胞质组分。分离得到的线粒体结构完整，可被线粒体标记物（如MitoLite™ Green）进行阳性染色。
分离后的线粒体保持其生物活性，并兼容多种下游应用，包括线粒体呼吸作用研究、线粒体膜电位检测、细胞凋亡分析、mtDNA与mtRNA研究以及线粒体蛋白谱分析等。该试剂盒提供两种线粒体分离方案：其一采用基于试剂的方法，可同时处理多个样本；其二采用Dounce均质化法
样品实验方案
简要概述
- 用PBS洗涤细胞
- 加入2 mL分离缓冲液
- 在冰上孵育10分钟
- 使用均质器均质化细胞或添加试剂A。
- 7000g离心10分钟
- 去除上清液（细胞质部分）
- 将沉淀重悬于分离缓冲液中
- 7000g离心10分钟
- 将沉淀重悬于测定缓冲液（线粒体级分）中
实验步骤
1.用冷PBS洗涤细胞一次。 对于悬浮的细胞，请通过离心收集细胞。
2.向细胞中加入2 mL分离缓冲液（组分A），并在冰上孵育10分钟。
3.可以通过两种方式提取细胞质。
①：将40 µL试剂A（组分B）加入混合物中，涡旋并在冰上孵育10分钟。
②：使用Dounce组织研磨机匀浆4-5次，使细胞匀浆。
4.在4°C下以600 g离心10分钟，收集上清液，在4°C下以7,000 g离心10分钟。 上清是细胞质部分。
5.将沉淀重悬于1 mL分离缓冲液（组分A）中，并在4°C下以7,000 g离心10分钟。
6.丢弃上清液，并根据下游应用将沉淀重悬在适当的测定缓冲液中。
7.蛋白质浓度可以通过Amplite 荧光荧光胺蛋白质定量试剂盒（Cat＃11100）进行定量。
试剂应用文献
Involvement of Ferroptosis Induction and Oxidative Phosphorylation Inhibition in the Anticancer-Drug-Induced Myocardial Injury: Ameliorative Role of Pterostilbene
