ReadiPrep 核/细胞质分离试剂盒
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存 |
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产品介绍
ReadiPrep 核/细胞质分离试剂盒可逐步分离哺乳动物细胞或组织中的核蛋白与胞质蛋白提取物。所得分离蛋白浓度高且能保持其生物活性。本试剂盒制备的核质提取物兼容多种下游应用，包括酶活性检测及荧光Western blotting等。
样品实验方案
简要概述
- 用PBS冲洗细胞
- 加入500 µL细胞质提取缓冲液
- 离心20秒
- 收集上清液（细胞质提取物）
- 将沉淀重新悬浮在150 µL 1X高盐缓冲液中
- 离心20分钟
- 收集上清液（核提取物）
溶液配制
工作溶液配制
1.细胞液提取缓冲液（1X）：
将100 µL的10X蛋白酶抑制剂（组分C）和1 µL的DTT（组分D）添加到0.9 mL的细胞质提取缓冲液（组分A）中。
2.核提取缓冲液（1X）：
将100 µL 10X蛋白酶抑制剂（组分C）和1 µL DTT（组分D）添加到0.9 mL核提取缓冲液（组分B）中。
注意：0.5 mL 1X细胞质提取缓冲液和150 µL 1X核提取缓冲液足以进行1次测定，并根据需要准备新鲜的缓冲液。
实验步骤
1.用冷PBS冲洗细胞1次。 对于悬浮的细胞，请通过离心收集细胞。
2.向细胞中加入500 µL 1X Cytosol提取缓冲液。 对于贴壁细胞，将贴壁细胞刮入1.5 mL离心管中。
3.剧烈涡旋以完全重悬细胞。
4.以16,000 g离心1-2分钟，然后将上清液（细胞质提取物）转移到另一个干净的试管中。 将试管放在冰上以备下游使用或在-80°C下保存。
5.将沉淀重悬于150 µL 1X核提取缓冲液中。
6.剧烈涡旋以完全重悬沉淀。
7.将试管在4°C旋转30分钟。
8.以16,000g离心20分钟，然后将上清液（核提取物）转移到另一个干净的试管中。 将试管放在冰上以备下游使用或在-80°C下保存。
试剂应用文献
AR expression-independent XRCC3 mediates DNA damage-induced p53/Bax signaling pathway activation against prostate cancer
