COVID-19肽底物Covidyte TF670

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适用范围

用于监测冠状病毒蛋白酶的活性

产品介绍

冠状病毒主蛋白酶在病毒基因表达和复制过程中起关键作用，通过对复制酶多蛋白的水解加工参与病毒生命周期，因此成为抗冠状病毒药物设计的重要靶点。基于蛋白酶抑制剂的治疗策略已在人类免疫缺陷病毒（HIV）和丙型肝炎治疗中取得成功，证明抑制多蛋白水解过程所需的病毒蛋白酶是治疗病毒感染的有效途径。同理，SARS-CoV-2主蛋白酶被认为是病毒复制的关键环节，因此成为新冠肺炎抗病毒治疗的重要研究方向。

Covidyte™ TF670是一种包含14个氨基酸序列（KTSAVLQSGFRKME）的肽底物，可被冠状病毒蛋白酶特异性切割。该暗FRET肽的N端和C端分别修饰了Tide Quencher™ 5（TQ5淬灭基团）和Tide Fluor™ 5（TF5荧光供体）。当肽链完整时，TF5的荧光会被TQ5有效淬灭；经冠状病毒蛋白酶水解后，TF5片段因脱离淬灭效应而产生显著增强的荧光。通过检测TF5的荧光强度即可有效监测冠状病毒蛋白酶的活性，这使得Covidyte™ TF670成为筛选冠状病毒蛋白酶抑制剂的强力高通量筛选工具。

TQ5-TF5荧光对已被证明是开发FRET蛋白酶底物的极有效组合。与常用的EDANS底物（如Covidyte™ EN450）相比，TF670底物具有更强、更持久的荧光特性，且不易受有色化合物干扰，可有效降低假阳性结果的出现。

样品实验方案

溶液配制

储备溶液配制

1.Covidyte TF670储备液（200X）：

向Covidyte TF670小瓶中添加25 µL（对于cat＃13540）或250 µL（对于cat＃13541）DMSO。

注意：制成单次使用的等分试样，并储存在-20°C下。

工作溶液配制

1.Covidyte TF670工作溶液：

在20 mM Tris缓冲液（pH 7.5）或自备缓冲液中以1：200稀释底物储备液。每个实验在96孔板中使用50μL底物溶液。

2.冠状病毒蛋白酶稀释：根据需要稀释冠状病毒蛋白酶。

实验步骤

（一个96孔板的样品方案）

1. 将50μLCovidyte TF670工作溶液和50μL冠状病毒蛋白酶稀释液添加到测定板的所有孔中。
2. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 640/680 nm（截止660nm）处检测荧光的增加。 

对于动力学读数：立即开始连续不断地测量荧光强度，并每5分钟记录一次数据，持续30-120分钟。
对于终点读数：在避光的条件下，将反应在所需温度下孵育30至120分钟。然后测量荧光强度。