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钙离子荧光探针购买攻略(干货)

 

 

市场的钙离子荧光探针五花八门,如何选择钙离子荧光探针?需不需要买丙磺舒?免洗的和去除培养基的有什么区别?今天百萤就带您了解一下!

1.添加丙磺舒的作用是什么?

丙磺舒是一种细胞膜中的有机阴离子转运蛋白的抑制剂。当带AM的钙离子荧光探针进入细胞后,会被细胞内酯酶水解变成带负电荷的形式,准备与钙离子结合。但一些细胞系含有阴离子转运蛋白,它会将已经成为负电荷形式的钙离子荧光探针运到细胞膜外,如图中红圈处所示。当加入丙磺舒后,就会抑制探针的外泄,从而让探针在胞内发挥出百分百的作用。

当然,有一些产品,是不需要添加丙磺舒的,如Cal-520AM以及Calbryte520AM,这两个系列的产品性能非常强大,丙磺舒就成了非必须的选项了。下图对比了在添加和不添加丙磺舒的情况下,Calbryte 520和Fluo-4的染色表现。由图中可以看出,添加或者不添加丙磺舒,对Calbryte 520的作用不是特别明显,但添加丙磺舒对Fluo-4的作用是肉眼可见的。

下表是我们总结的绿色钙离子荧光探针的性能的对比。

产品 Ex/Em 信号背景比(S/B) 相对亮度 是否需要丙磺舒 细胞内保留 加载时间
Fluo-3 506/526 2 50 需要 极低 1 h
Fluo-4 494/516 4.5 100 需要 1 h
Fluo-8 490/514 4.5 ~200 需要 0.5-1 h
Cal-520 492/514 9.0 ~150 不需要 1-2 h
Calbryte520 490/515 10.0 ~350 不需要 0.5-1 h

 

2.免洗和去除培养基的区别是什么?

如图:左边为免洗探针染色后的细胞;右边为去除培养基探针染色后的细胞。

免洗的特点:它可以非常高效且显著降低荧光背景。

去除培养基的特点:在敏感目标和多路复用中使用效果比较好。

图注:1.用到的缓冲液:HHBS [Hanks' Buffer with 20 mM Hepes] ;非离子表面活性剂:Pluronic® F-127 ;阴离子抑制剂: 丙磺舒。2.如果需要去除培养基,请添加:Screen Quest 10X细胞染色缓冲液。3.孵育时间:30-60min并冷却至室温;4.去除培养基后,我们就可以得到对照组(右下角图);5.添加ATP或药物;6.使用荧光显微镜/荧光酶标仪/流式细胞仪进行检测,得到最终图片(左下角图)。

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