Amplite 高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒 *最大化发光*

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产品优势

1.信号稳定性：发光信号半衰期长达1小时，确保多板检测结果的一致性

2.操作便捷性：可直接用于标准细胞培养基体系，无需特殊处理

3.应用灵活性：特别适合分泌型蛋白的实时动态监测研究

 

适用范围

用于检测高斯（Gaussia）荧光素酶活性

 

产品介绍

报告基报告基因主要包括β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶和荧光素酶三大类。其中，萤火虫荧光素酶凭借其卓越的通用性成为最常用的报告基因。近年来，源自海洋桡足类生物的高斯（Gaussia）荧光素酶等新型报告基因的应用呈现稳定增长趋势，这类报告基因具有分子量更小（仅20kDa）且不依赖ATP的显著优势。特别值得注意的是，高斯荧光素酶在哺乳动物细胞中表达后能够被高效分泌至细胞培养上清中。

高斯荧光素酶通过催化腔肠素（coelenterazine）的氧化反应产生生物发光信号。我们的Amplite®高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒采用专利发光底物配方，可精准定量细胞培养基中的荧光素酶活性。该检测体系在与高斯荧光素酶相互作用时能产生高强度发光信号，其技术特点包括：提供检测所需全部关键组分、兼容高通量液体处理系统、检测灵敏度高、支持96孔板和384孔板检测模式

 

适用仪器

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发光酶标仪
推荐孔板:	纯白色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备样品 (50 µL)

2.加入 50 µL 高斯荧光素酶工作溶液

3.室温孵育 10 - 15 分钟

4.检测发光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液的配制

高斯荧光素酶原液 (100X)

将 50 µL（适用于 Cat#12530）、0.5 mL（适用于 Cat#12531）或 2.5 mL（适用于 Cat#12532）反应缓冲液（组分 B）转移至 1 瓶荧光素酶底物（组分 A）中，并充分混合。

注意：添加前，先短暂离心，然后打开荧光素酶底物（组分 A）小瓶。

 

1.工作溶液配制

使用检测缓冲液（组分 C）按 1:100 稀释倍数稀释 100X 高斯荧光素酶检测储备液，制备 高斯荧光素酶工作液。

注意：重构的高斯荧光素酶工作溶液对光非常敏感。它不稳定，应新鲜配制，置于冰上，并在 2 小时内使用。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

1. 通过在所需化合物缓冲液中添加 10 µL 10X 测试化合物（96 孔板）或 5 µL 5X 测试化合物（384 孔板），用测试化合物处理细胞（或样品）。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

2. 将细胞板在 37°C、5% CO2 培养箱中孵育所需的时间，通常为 4 小时至过夜。

3. 运行 Gaussia 荧光素酶测定：将 50 µL/孔/96 孔板或 12.5 µL/孔/384 孔板连续稀释的 Gaussia 荧光素酶或培养上清液移至微量滴定板中，然后与 50 µL/孔/96-孔板混合。 Gaussia 荧光素酶工作溶液的孔板或 12.5 µL/孔/384 孔板。

4. 将孔板在室温下避光孵育 10 至 15 分钟。

5. 用光度计读取发光强度。 

 

试剂应用文献

Use of Tox21 screening data to profile PFAS bioactivities on nuclear receptors, cellular stress pathways, and cytochrome p450 enzymes
Authors: Ooka, Masato and Sakamuru, Srilatha and Zhao, Jinghua and Qu, Yanyan and Fang, Yuhong and Tao, Dingyin and Huang, Ruili and Ferguson, Stephen and Reif, David and Simeonov, Anton and others,
Journal: Journal of Hazardous Materials (2024): 134642