鬼笔环肽-iFluor 488标记

产品货期

现货

产品优势  

鬼笔环肽-iFluor® 488偶联物是一种F-肌动蛋白特异性探针，具有明亮的绿色荧光，可实现对固定及透化细胞内丝状肌动蛋白的高亲和力可视化与定量分析。

F-肌动蛋白特异性结合：双环肽结构可结合于肌动蛋白单体之间（解离常数Kd约20 nM）

卓越光稳定性：iFluor® 488偶联物比FITC偶联物具有更强的抗光漂白能力

固定细胞兼容性：耐受细胞透化与封片处理流程

高分辨率成像：可清晰标记应力纤维、片状伪足及丝状伪足等细胞骨架结构

适用样品类型

仅用于固定细胞。固定和透化细胞、细胞培养、无细胞实验、甲醛固定和透化组织切片

产品介绍

鬼笔环肽偶联物能以高亲和力标记固定化及透化处理的细胞中的F-肌动蛋白。

鬼笔环肽是一种从剧毒鹅膏菌（Amanita phalloides）中分离的双环七肽，其对丝状肌动蛋白（F-肌动蛋白）沟槽的结合亲和力远高于单体G-肌动蛋白，因而被用于组织切片、细胞培养物或无细胞体系中F-肌动蛋白的可视化与定量分析。相比肌动蛋白特异性抗体，鬼笔环肽的非特异性结合可忽略不计，能在细胞成像中实现极低背景和高对比度。一旦与F-肌动蛋白结合，鬼笔环肽会将单体与纤丝的平衡向纤丝端移动，并抑制ATP水解。这种相互作用通过阻止亚基解离来稳定肌动蛋白丝，同时通过降低临界浓度促进肌动蛋白聚合。

当与荧光染料偶联时，纳摩尔浓度的鬼笔环肽可用于标记和观察固定透化细胞、细胞培养物、无细胞实验体系以及甲醛固定透化组织切片中的F-肌动蛋白。鬼笔环肽偶联物对所有类型和大小的肌动蛋白丝均表现出相似的亲和力，在肌肉与非肌肉细胞中均以1:1（鬼笔环肽:肌动蛋白）的化学计量比结合。相较于抗体，鬼笔环肽衍生物分子量小（<2 kDa），鬼笔环肽结合的肌动蛋白丝不会影响肌动蛋白丝的功能特性。小分子特性还能实现更密集的F-肌动蛋白标记，从而在高分辨率成像中获得更精细的染色效果。此外，由于肌动蛋白在进化上高度保守，鬼笔环肽衍生物的结合特性可用于多种动植物细胞的染色研究。

注意事项

产品外观形态：液体（浓度1mg/ml）（注：鬼笔环肽系列产品有固体和液体两种，液体为DMSO溶解后的产品，则不需再溶解。）

样品分析方案

概述

1.将样本置于微孔板孔中

2.吸弃孔内液体

3.每孔加入100 μL鬼笔环肽-iFluor 488标记液

4.室温避光孵育20–90分钟

5.清洗细胞去除未结合染料

6.使用FITC滤光片进行荧光显微镜观察

注意：将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。

储存条件

-20℃避光保存可稳定至少6个月，避免反复冻融

鬼笔环肽具毒性（半数致死量LD50=2 mg/kg），虽单管含量极低（仅对蚊虫可能致命），仍需谨慎操作

工作溶液配置

鬼笔环肽-iFluor 488标记工作溶液

取1 µL鬼笔环肽-iFluor 488标记原液加入1 mL含1% BSA的PBS缓冲液中混匀。

注意1. 鬼笔环肽标记原液需分装后-20℃避光保存

       2.不同细胞类型染色效果可能存在差异，建议根据实际情况调整工作液浓度

样本实验操作流程

细胞染色

1.使用3.0-4.0%甲醛PBS溶液室温固定细胞10-30分钟

注意：避免使用含甲醇固定剂，甲醇会破坏肌动蛋白结构。推荐使用无甲醇甲醛固定剂

2.PBS缓冲液洗涤固定后细胞2-3次

可选：为提高通透性，可加入0.1% Triton X-100 PBS溶液处理3-5分钟，之后用PBS洗涤2-3次

3.向96孔板每孔加入100 μL鬼笔环肽-iFluor 488工作液，室温避光染色20-90分钟

4.用PBS轻柔洗涤2-3次去除多余标记物，封片后使用FITC滤光片组进行荧光显微镜观察

试剂应用文献