蛋白酶体20S荧光底物(Ac-ANW)2R110

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产品优势

灵敏度高

适用范围

用于蛋白酶体20S-β5i亚基的选择性荧光底物

产品介绍

(Ac-ANW)2R110是一种用于蛋白酶体20S-β5i亚基的选择性荧光底物。该无荧光底物酶解后可产生明亮的绿色荧光罗丹明110产物，其发射光谱可通过FITC滤光片组轻松检测。此类罗丹明110底物的灵敏度显著高于基于AMC、AFC或4-硝基苯胺的底物。

蛋白酶体最常见的形式是26S蛋白酶体，由1个20S核心颗粒结构和2个19S调节帽组成。所有20S颗粒均包含四个堆叠的七聚体环状结构，这些环状结构由两种不同类型的亚基构成：α亚基主要起结构作用，而β亚基则主要承担催化功能。堆叠结构的外侧两个环各由7个α亚基组成，作为调节颗粒的锚定位点，其N末端形成门控结构以阻止底物无序进入内核空腔；内侧两个环各由7个β亚基构成，其中包含执行蛋白水解反应的蛋白酶活性位点。在哺乳动物中，β1、β2和β5亚基具有催化活性。虽然它们共享相同的催化机制，但具有三种不同的底物特异性：糜蛋白酶样、胰蛋白酶样和肽酰谷氨酰肽水解活性。此外，在造血细胞中响应促炎信号（特别是γ干扰素等细胞因子）刺激时，可表达替代性β亚型β1i、β2i和β5i。

操作方法

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在DMSO中制备5至10 mM的储备溶液。

2.准备2X蛋白酶体底物（20至50μM）测定溶液，如下所示：

25至50 ul 底物储备液（10 mM）

100 ul DTT（1M）

400 ul EDTA（100 mM）

10mL Hepes Buffer（25mM），pH = 7.4

3.将等体积的蛋白酶体标准品或样品与 2X 荧光蛋白酶体底物测定溶液（来自步骤 1）混合，并在室温下孵育溶液至少 1 小时。

4.监测荧光使用荧光酶标仪。

参考文献

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