酶显色底物ADP-ribose-pNP

产品货期

咨询

产品介绍

ADP-核糖-pNP 是一种用于评估聚ADP核糖聚合酶（PARP）活性的显色底物。通过测定405 nm波长处释放的对硝基苯酚（p-nitrophenol）吸光度值，并利用校准曲线斜率将吸光度值转换为产物摩尔数。使用ADP-核糖-pNP作为比色底物时，测得PARP-1具有最大的Km和Vmax值（分别为151 μM和1.30 nmol·min⁻¹·mg⁻¹），其次为端锚聚合酶-1（tankyrase-1，分别为82 μM和18 pmol·min⁻¹·mg⁻¹）和VPARP（分别为46 μM和2 pmol·min⁻¹·mg⁻¹ ）  

该显色底物可用于测定PARP-1、端锚聚合酶-1和VPARP的动力学参数，并用于筛选针对这些酶的小分子抑制剂。基于ADP-核糖-pNP的连续检测法相比标准间断式PARP检测具有显著优势，能够实现对PARP-1、端锚聚合酶-1和VPARP活性及其抑制剂的高通量筛选。

适用仪器

样品实验方案 

溶液制备 

储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。

 ADP-核糖-pNP原液：

在H₂O中制备5-10mM的储备溶液。

注意：应立即使用原液。

工作溶液

ADP-核糖-pNP工作溶液：

通过用测定缓冲液（50mM Tris，10mM MgCl 2，pH 8.0）稀释储备溶液来制备0.25mM测定溶液。

样品操作步骤

1.将0.01mL /孔的样品溶液加入0.09mL /孔测定溶液中，使96孔透明板中的终体积为0.1mL。

2.使用吸光度酶标仪在405nm处监测平板。