Amplite 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒 蓝色荧光

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产品优势

在 100μL 的反应体系中可检测到低至10mU/mL  的 ALT

 

适用范围

用于丙氨酸转氨酶检测

 

产品介绍

丙氨酸氨基转移酶（ALT，又称血清谷丙转氨酶/GPT）是转移酶家族成员，催化丙氨酸与谷氨酸间α-氨基的可逆转移，在氨基酸代谢中发挥重要作用。ALT主要存在于肝脏，在心脏、肌肉和肾脏中也有少量分布。健康人群血清ALT水平较低，但当发生急慢性肝炎、梗阻性黄疸、肝癌或心肌梗死等细胞损伤时，ALT会大量释放入血导致血清水平显著升高，因此ALT检测具有重要临床诊断价值。

Amplite® 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒为测量多种生物样本中的 ALT 提供了一种快速且灵敏的方法。ALT 催化丙氨酸与 α- 酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸，产物谷氨酸通过酶偶联反应循环生成蓝色产物，进而实现对谷氨酸的检测。该信号可通过吸光度酶标仪在 A570nm 与 A610nm 的吸光度比值下读取。使用 Amplite® 比色法丙氨酸转氨酶检测试剂盒，在 100μL 的反应体系中，可检测到低至 10mU/mL 的 ALT。该检测方法稳定性强，能够轻松适用于多种应用场景。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	570/610nm
推荐孔板:	透明底板

96孔板测定示例

概述

准备ALT反应混合物（50μL）

加入ALT标准品或测试样品（50μL）

孵育于37°C 30分钟至60分钟

监测吸光度在575±5 nm处增加或在A570nm / A610nm处的吸光度比率

注意：在开始实验之前，在室温下解冻一个组分A和B

 

操作方法

1.准备ALT标准品的连续稀释液（1至1000 mU / mL）：

1.1将100μLDPBS加入ALT阳性对照（组分D）小瓶中，制成100U / mL ALT储备液。

注意：未使用的ALT原液应分成单次使用的等分试样并储存在20℃。

1.2将10μL的100 U / mL ALT标准溶液（来自步骤1.1）加入含有0.1％BSA的990L DPBS缓冲液中，以产生1U / mL ALT标准溶液。

1.3取300μL1U/ mL ALT标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0 mU / mL ALT标准品系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述，将ALT标准品和含有ALT的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微孔板中。

注意：如果需要，将测试样品稀释至含有0.1％BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

 

2.准备ALT测定混合物：

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶（组分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL ALT分析缓冲液（组分B）加入ALT酶混合物瓶中（组分A），并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液（来自步骤2.1）加入ALT酶混合物溶液（来自步骤2.2）以得到ALT测定混合物。

注意1：该ALT测定混合物足以用于两个96孔板。在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注意2：或者，可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50X的ALT酶混合物原液，然后通过将原液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD混合制备ALT测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X ALT酶混合物原液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃，避免冻融循环。

 

3.运行ALT测定：

3.1将50μLALT测定混合物（来自步骤2.3）添加至ALT标准品，空白对照和测试样品（参见步骤1.4）的每个孔中，以使总ALT测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLALT测定混合物。

3.2在37°C下孵育反应30分钟至60分钟，避光。

注意：空白控制的背景随着时间的推移而增加。

3.3使用吸光度读数器在575±5 nm或吸光度比率A570nm / A610nm监测吸光度增加，以提高检测灵敏度。