Amplite 比色法醛类定量试剂盒

Amplite 比色法醛类定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法，如HPLC-MS 或者GC-MS，这种方案成本昂贵、操作繁杂，不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒使用独特的染料，该染料与醛反应后形成荧光产物。本试剂盒提供灵敏的一步法醛类检测，检测灵敏，可以在100ul检测体积中能检测到1nmol的醛类。试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何额外步骤，就可以轻易地实现自动化。终反应信号可通过酶标仪在405或者550nm处方便地读取。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法醛类定量试剂盒。 

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	550nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.准备酶反应（50μL）
2.添加2X AldeView 黄色工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30至60分钟
4.监测405或550 nm处的吸光度增加

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1醛标准溶液（10 mM）：
将1mL稀释缓冲液（组分D）加入到醛标准品（组分C）的小瓶中以制备10mM醛标准溶液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取10mM醛标准溶液，进行1:10稀释，得到1000μM醛标准溶液（AS7）。 然后进行1：3连续稀释，得到醛标准品（AS6-AS1）的剩余连续稀释液。

 

3.工作溶液

将5 mL测定溶液（组分B）加入AldeView 黄色（组分A）中，并充分混合。 注意：5 mL 2X AldeView 黄色反应混合物足以容纳1个平板。 反应混合物不稳定。 在2小时内使用。 注意：分析方案（组分B）具有潜在危险，处理时戴上手套。

 

样品分析

表1.白色/透明底96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品（AS1-AS7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（1至1000μM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：BSA和吐温20都会干扰测定，样品中使用低于0.001％的BSA和0.01％的吐温20。 注意：如果含醛样品来自酶反应，例如果糖-1,6-二磷酸酯和果糖-1,6-二磷酸醛缩酶，则根据需要制备50μL酶反应（对于384孔板25μL）。 将酶反应在37°C孵育至少1小时。 应根据需要优化酶反应的组分（例如，特定酶反应可能需要优化的缓冲系统）。 在大多数情况下，如果您没有优化的酶缓冲液，稀释缓冲液（组分D）也可用于运行酶反应。

2.在醛标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeView 黄色工作溶液，使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAldeView 黄色工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在室温下孵育30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在405或550 nm处监测吸光度的增加。 注意：不同浓度的醛可能会与AldeView 黄色形成不同的颜色。 在较低浓度下，405nm处的吸光度给出佳结果。 然而，在较高浓度下，吸光度倾向于移至550nm。

 

参考文献

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12--26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65--73

 

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