Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒 黄色荧光

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产品优势

1.即混即测"式操作流程：无需复杂前处理

2.高通量兼容性：完美适配自动化液体处理系统

 

适用范围

用于检测碱性磷酸酶活性

 

产品介绍

碱性磷酸酶是一种在酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学、Northern 印迹、Southern 印迹和 Western 印迹等应用中具有高度敏感性的酶。它广泛应用于各种生物学检测（尤其是免疫检测）以及基于 ELISA 的诊断领域。

Amplite® 碱性磷酸酶检测试剂盒采用对硝基苯磷酸酯（pNPP）—— 一种显色性磷酸酶底物，科精准定量溶液中、细胞提取物中以及固体表面（如PVDF膜）上的碱性磷酸酶活性。该试剂盒提供了所有必要的组分，并配有经过优化的 “混合后读取” 检测方案，适用于高通量筛选（HTS）液体处理仪器。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	400nm
推荐孔板:	透明底板

样品实验方案

简要概述

1.制备碱性磷酸酶标准品和 / 或待测样品（50 µL）

2.加入碱性磷酸酶（ALP）工作液（50 µL）

3.在室温或 37°C 下孵育 10-30 分钟

4.监测 400 nm 处吸光度的增加

 

储备液的制备

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用的 aliquots（小份），制备后于 - 20°C 储存，避免反复冻融。

pNPP 储备液（100X）：

向 pNPP（组分 A）的试剂瓶中加入 300 µL 蒸馏水（H₂O），充分混匀。pNPP 储备液应立即使用。

注：若储存得当，该溶液可稳定 3-4 周。

 

碱性磷酸酶标准溶液：

向碱性磷酸酶标准品（组分 C，10 单位）中加入 100 µL 含 0.1% 牛血清白蛋白（BSA）的蒸馏水（H₂O - 0.1% BSA），配制成 100 单位 / ml的碱性磷酸酶标准溶液。

 

标准溶液的制备 

碱性磷酸酶标准品

为方便操作，可使用系列稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11950

1.取 10 µL 100 单位 / mL的碱性磷酸酶标准溶液，加入 990 µL 含 0.1% 牛血清白蛋白（BSA）的蒸馏水（H₂O - 0.1% BSA）中，配制成 1000 mU/mL 的碱性磷酸酶标准溶液。

2.取 100 µL 1000 mU/mL 的碱性磷酸酶标准溶液，进行 1:10 稀释，得到 100 mU/mL 的碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。

3.再进行 1:3 系列稀释，得到其余标准品（AS6 - AS1）。

注：稀释后的碱性磷酸酶标准溶液若有剩余，应予以丢弃。

 

工作液的制备

向 5 mL 检测缓冲液（组分 B）中加入 50 μL pNPP 储备液（100X），配制成总体积为 5.05 mL 的 pNPP 工作液。

关于细胞样品制备的指导说明，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

 

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.1至100 mU / mL）
BL	50ul	H2O-0.1％BSA
TS	50ul	测试样品

在上清液中：

1.根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向碱性磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液，使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。 384孔板，在每孔中加入25μLpNPP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

在细胞中：

1.根据需要处理细胞。

2.将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）中。 注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

3.将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

 

试剂应用文献

Micro-arranged ZnO particles and conductive fillers in PCL composites for enhanced piezoelectric and dielectric properties in bone tissue engineering applications
Authors: Fern{\'a}ndez-Gil, Francisco and Olate-Moya, Felipe and Aguilar-Cosme, Jos{\'e} Ricardo and Garcia-Molleja, Javier and Fern{\'a}ndez-Bl{\'a}zquez, Juan Pedro and Cartmell, Sarah and Palza, Humberto
Journal: Materials \& Design (2025): 113672