Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒

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适用范围

用于α-酮戊二酸定量检测

产品介绍

α-酮戊二酸（α-ketoglutarate）是三羧酸循环的关键代谢分子，直接决定生物体柠檬酸循环的整体速率。作为谷氨酸和谷氨酰胺的前体物质，α-酮戊二酸也是胃肠道细胞的重要代谢燃料，具有减少蛋白质分解、促进蛋白质合成以增强骨骼肌组织形成的功能，临床应用价值显著。该分子可用于治疗肾脏疾病、胃肠功能障碍（包括细菌感染）、肝脏疾病、白内障及复发性酵母菌感染，并能改善接受血液透析治疗的肾病患者对蛋白质的代谢能力。

AAT Bioquest公司的Amplite®比色法α-酮戊二酸定量检测试剂盒提供了一种高灵敏度的生物样本检测方案。该检测基于酶偶联反应释放过氧化氢的原理，通过Amplite® Red显色系统在570 nm波长处进行吸光度检测，实现对α-酮戊二酸的精准定量。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品（50μL）
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液（50μL）
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Amplite TM Red（组分A）的小瓶中以制备200X储备溶液。

2.标准溶液

2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品（组分D）加入990μLPBS中，得到100μMα-酮戊二酸标准溶液（AKG7）。 然后进行1：2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品（AKG6-AKG1）。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合物1瓶（组分B1）中并充分混合。

3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3将整个小瓶（100μL）的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意：5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

样品分析

表1.在96孔透明底微孔板中的α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品（AKG1-AKG7,1.563至100μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品（AKG），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向α-酮戊二酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸工作溶液，使总α-酮戊二酸测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在37℃孵育60-90分钟。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，在OD为570nm时进行路径检查。