Amplite 比色法钙离子定量试剂盒*蓝色*

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产品优势  

专利技术：采用Calcium Blue™显色指示剂，在中性pH条件下与钙离子特异性结合

 

适用范围

用于钙离子检测

 

产品介绍

钙离子（Ca²⁺）作为生命活动不可或缺的元素，在细胞生理过程中扮演着双重角色：既是调控多种细胞活动的关键信号分子（通过胞质内外的浓度变化实现），又是构成骨骼的主要结构成分。作为人体含量第五的必需元素，钙离子通过精确的浓度调控（血清正常范围：9-10.5 mg/dL）参与血管舒缩、神经传导、肌肉收缩和激素分泌等核心生理过程。临床上，慢性肾功能衰竭、维生素D缺乏和酗酒导致的低镁血症均可引发病理性低钙血症，而钙浓度异常（低钙血症或高钙血症）均会导致严重机能紊乱。

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒采用专利Calcium Blue™显色指示剂，该试剂在中性pH条件下与钙离子特异性结合产生钙蓝色 - 钙复合物，并在650 nm波长处产生特征性吸收峰，为研究人员提供了简便可靠的检测方案。

 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

准备测试样品和钙标准溶液（50μL）
添加Calcium Blue 试剂（50μL）
在室温下孵育5-10分钟
监测600或650 nm处的吸光度强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
钙标准溶液（3 mM）：
将10μL标准钙（300mM）（组分C）加入到990μL稀释缓冲液（组分B）中以得到钙标准溶液（3mM）并充分混合。

 

2.钙标准溶液配制

 

操作步骤

 

表1.透明底96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。

CS =钙标准（CS1-CS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
CS1	CS1	...	...
CS2	CS2	...	...
CS3	CS3
CS4	CS4
CS5	CS5
CS6	CS6
CS7	CS7

 

表2.每个孔的试剂组成

钙标准	空白对照	测试样本
连续稀释：50μL	稀释缓冲液（化合物B）：50μL	50 µL

 

钙测定

将连续稀释的钙标准品从150μM加至2.34μM加入CS1至CS7的孔中，一式两份。

向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLCaliumBlue （组分A），使总钙测定体积达到100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

 

血清或尿液样本的分析方案

表3.每个孔的试剂组成

钙标准	空白对照	血清或尿液
连续稀释液：10μL	稀释缓冲液（化合物B）：10μL	10 µL

 

钙测定

1.将1.5μM至0μM的连续稀释的钙标准品一式两份加入CS1至CS7的孔中。

2.向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入200μL钙蓝™（组分A），使总钙测定体积达到210μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

4.用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。