Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒

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适用范围

用于肠激酶活性检测

产品介绍

肠激酶（又称肠肽酶）是由十二指肠壁细胞分泌的一种丝氨酸蛋白酶，在人类和动物消化系统中扮演关键角色。该酶通过将胰蛋白酶原转化为活性形式胰蛋白酶，进而激活一系列胰腺消化酶。肠激酶缺乏会导致肠道消化功能障碍，而其抑制则可能通过阻断致癌和转移相关蛋白酶发挥抗肿瘤效应。因此，高选择性、高灵敏度的肠激酶检测在生化应用领域具有重要意义。

Amplite®比色法肠激酶活性检测试剂盒提供了一种灵敏的定量检测方案。当肠激酶底物被酶切后，可通过EK Yellow™显色系统在405 nm波长处用酶标仪进行吸光度检测。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.用稀释的肠激酶标准品（50μL）制备测试样品
2.加入等体积的肠激酶工作液（50μL）
3.在37°C孵育30-60分钟
4.监测OD增加到405nm

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. EK Yellow 原液（100X）：
将50μLDMSO（组分E）加入EK Yellow （组分A）中以制备100X储备溶液。

2.肠激酶底物储备液（100X）：
将50μLDMSO（组分E）加入肠激酶底物（组分B）中以制备100X储备溶液。

3.肠激酶标准溶液（10ug / mL）：
将50uL ddH2O + 0.1％BSA加入肠激酶标准小瓶（组分D）中以制备10μg/ mL肠激酶原液。

2.标准溶液

肠激酶标准
将10μL10μg/ mL肠激酶标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分C）中，得到100ng / mL肠激酶溶液（EK7）。 然后在测定缓冲液中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的肠激酶标准品（EK6-EK1）。

注意：EK标准仅用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准。

3.工作溶液

将50μLEKYellow 储备液和50μL肠激酶底物储备液加入5 mL分析缓冲液（组分C）中; 混合均匀，制成肠激酶（EK）工作溶液（组分A + B + C）。

注意：对于一个96孔板，测定混合物就足够了。 配制的工作溶液不稳定，需快速使用。

样品分析

表1.在96孔透明底微孔板中肠激酶标准品和测试样品的布局。 EK =肠激酶标准品（EK1-EK7,1.56至100ng / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2中提供的布局，将肠激酶标准品（EK），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底微孔板中。对于384孔板，使用25μL 每孔试剂代替50μL。

2.在肠激酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLEK工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLEK工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在37℃孵育30-60分钟。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，在OD为405nm时进行路径检查。