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Amplite 比色法锌离子定量试剂盒

英文名称:Amplite® Colorimetric Zinc Ion Quantitation Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量N/A溶剂-
存储条件-
产品概述

产品货期

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适用范围

用于锌离子检测

 

产品介绍

锌作为一种必需微量矿物质元素,在多种生物学过程中发挥着关键作用。它是多种酶活性中心、蛋白质结构稳定以及基因表达调控不可或缺的必需因子。锌的生理状态直接影响细胞分裂、生长、分化、发育和衰老等基本生命过程。临床锌缺乏症状包括肢端皮炎、免疫功能低下、腹泻、伤口愈合不良、发育迟缓、性腺功能减退、胎儿生长障碍、致畸甚至流产等。在科研和药物研发领域,亟需简便、直接且支持自动化操作的锌检测方法。

AAT Bioquest公司推出的Amplite®比色法锌定量检测试剂盒,采用专利探针Zn-620™,为生物样本中的锌浓度检测提供了简便解决方案。该探针具有以下特点:

1)与锌离子结合后在620 nm处产生显著吸光度增强(>100倍);

2)对Zn²⁺具有高度特异性,几乎不与Ca²⁺、Mg²⁺等其他金属离子发生反应;

3)检测灵敏度达1 µM,适用于血清、血浆和尿液等多种生物样本检测。

此外,AAT Bioquest还提供更灵敏的Amplite®荧光法锌离子定量检测试剂盒(货号#19000),其检测下限可达0.1 µM,为低浓度锌离子检测提供了好的选择。

 

适用仪器


吸光度酶标仪  
吸光度: 610/470 nm
推荐孔板: 白色底板
实验方案

实验流程概览

概述

1.制备Zn²⁺标准品或待测样品(50 µL)

2.加入锌工作液(50 µL)

3.室温孵育5-10分钟

4.读取A610nm/A470nm吸光度比值

 

储备液配制

ZnCl₂标准液(1 mM)

取10 µL 100 mM ZnCl₂标准液(组分C)加入990 µL检测缓冲液(组分B)混匀

注意事项:所有未使用的储备液应分装为单次用量,制备后保存于-20°C,避免反复冻融 

 

标准品梯度稀释 

推荐使用在线稀释计算工具 https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/19001

 

ZnCl2 标准品

取100 μL 1 mM ZnCl₂标准溶液加入900 μL检测缓冲液(组分B)中,混匀制备得到100 μM中间标准液(Zn1);以此为基础,使用检测缓冲液(组分B)进行1:2连续稀释,最终获得7个浓度梯度的ZnCl₂标准溶液(Zn2-Zn7,浓度范围1.56-100 μM)。

 

工作溶液的制备

取25 μL Zn-620™探针(组分A)加入5 mL检测缓冲液(组分B)中,充分混匀即得锌检测工作液

 

实验操作流程

表1. 96孔透明底板布局(Zn=锌标准品(Zn1-Zn7,100-1.56μM);BL=空白对照;TS=待测样品)

BL BL TS TS
Zn1 Zn1 ... ...
Zn2 Zn2 ... ...
Zn3 Zn3    
Zn4 Zn4    
Zn5 Zn5    
Zn6 Zn6    
Zn7 Zn7    

表2. 各孔试剂组成

孔类型 体积 试剂组成
Zn1 - Zn7 50 µL Serial Dilutions (100 to 1.56 µM)
BL 50 µL Assay Buffer
TS 50 µL test sample

 

1.使用检测缓冲液(组分B)将待测样品稀释至1.56-100 μM浓度范围;

2.按照表1和表2所示布局,分别加入锌标准品(Zn)、空白对照(BL)和待测样品(TS)。注:若使用384孔板,每孔加样体积改为25 μL;

3.向各孔加入50 μL锌工作液(总体积100 μL/孔)。注:384孔板改为25 μL/孔(总体积50 μL/孔);

4.室温避光反应5-10分钟;

6.使用酶标仪测定A610nm/A470nm吸光度比值变化。