Amplite 乙醇定量试剂盒

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产品优势

1.灵敏度高

2.稳定性好

3.操作简单快捷，30分钟内即可完成检测

 

适用范围

用于乙醇定量检测

 

产品介绍

基乙醇快速定量检测技术在生命科学研究、临床评估及食品药品行业具有重要应用价值。本非放射性乙醇检测试剂盒基于乙醇氧化酶催化乙醇氧化反应原理，采用Amplite®Red双模式检测技术，支持荧光与比色双信号读取模式。

Amplite 乙醇定量试剂盒提供经过优化的全套检测组分及标准化操作流程，具有检测稳定、灵敏度高等特点，可轻松适配各类乙醇检测的高通量分析需求，30分钟内即可完成检测。

样品实验方案

简要概述

准备乙醇工作溶液（50μL）
添加乙醇标准品或测试样品（50μL）
在室温下孵育5-30分钟
监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（截止= 570 nm）

 

溶液制备

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。

1. 1Amplite 乙醇试剂原液（250X）：
将40μLDMSO（组分D）加入到Amplite 乙醇试剂（组分A）的小瓶中以制备250X Amplite 乙醇试剂储备溶液。 应立即使用原液。

注意：Amplite 乙醇试剂在硫醇如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇存在下不稳定。 反应中DTT或2-巯基乙醇的浓度应不高于10μM。 Amplite 乙醇试剂在高pH（> 8.5）下也不稳定。 因此，反应应在pH 7-8下进行。推荐提供的测定缓冲液（pH 7.4）。

1.2乙醇酶混合物（100X）：
将100μL测定缓冲液（组分B）加入到乙醇酶混合物（组分C）的小瓶中并充分混合以制备100X乙醇酶混合物。

 

2.标准溶液配制

2.1乙醇标准溶液配制
通过将适量的100％乙醇标准品（组分E）稀释到H 2 O中来制备乙醇标准品，以产生0％至0.1％的乙醇浓度。 包含0％乙醇对照作为空白对照。 乙醇浓度应低两倍（即0％至0.05％）。

 

3.工作溶液配制

将20μL250XAmplite 乙醇试剂储备溶液和50μL100X乙醇酶混合物加入5mL分析缓冲液（组分B）中以制备乙醇工作溶液。

 

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中乙醇标准品和测试样品的布局。

ES =乙醇标准品（ES1-ES7,0.0001％至0.1％），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
ES1	ES1	...	...
ES2	ES2	...	...
ES3	ES3
ES4	ES4
ES5	ES5
ES6	ES3
ES7	ES7

表2.每个孔的试剂组成

孔	规格	试剂
ES1-ES7	50ul	连续稀释液（0.0001％至0.1％）
BL	50ul	水
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备乙醇标准品（ES），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

注意：高浓度的乙醇（例如0.5％终浓度）可能会由于Amplite 乙醇试剂的过度氧化（导致非荧光产物）而导致荧光信号降低。

2.向乙醇标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL乙醇工作溶液，使总乙醇测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL乙醇工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（Ex / Em = 540 / 590nm），截止= 570nm监测荧光强度。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。