Amplite 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒

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产品优势

在 100μL 的反应体系中可检测到低至 4 mU/mL 的 ALT

适用范围

用于丙氨酸转氨酶检测

产品介绍

丙氨酸氨基转移酶（ALT，又称血清谷丙转氨酶/GPT）是转移酶家族成员，催化丙氨酸与谷氨酸间α-氨基的可逆转移，在氨基酸代谢中发挥重要作用。ALT主要存在于肝脏，在心脏、肌肉和肾脏中也有少量分布。健康人群血清ALT水平较低，但当发生急慢性肝炎、梗阻性黄疸、肝癌或心肌梗死等细胞损伤时，ALT会大量释放入血导致血清水平显著升高，因此ALT检测具有重要临床诊断价值。

Amplite® 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒为测量多种生物样本中的 ALT 提供了一种快速且灵敏的方法。ALT 催化丙氨酸和 α- 酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。产物谷氨酸通过酶偶联反应循环生成红色荧光产物来进行检测，其信号可通过荧光酶标仪读取。使用 Amplite® 荧光法丙氨酸转氨酶检测试剂盒，在 100μL 的反应体系中可检测到低至 4 mU/mL 的 ALT。该检测方法稳定性强，能够轻松适用于多种应用场景。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备ALT工作溶液（50 µL）
2.加入ALT标准液或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至60分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
1.1 ALT标准溶液：
将100 µL DPBS加到ALT阳性对照（成分D）的小瓶中，制成100 U / mL ALT储备液。

2.标准溶液

ALT标准
将10 µL 100 U / mL ALT标准溶液加到含0.1％BSA的990 µL DPBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL ALT标准溶液（ALT7）。 取1000 mU / mL ALT标准溶液并进行1：3连续稀释，以得到ALT标准品（ALT6-ALT1）的连续稀释液。

3.工作溶液

3.1 NAD解决方案（100X）：
将100 µL ddH2O加入NAD小瓶（组分C）。

3.2 ALT酶混合物溶液：
将10 mL ALT分析缓冲液（组分B）添加到ALT酶混合物（组分A）瓶中，并充分混合。

3.3 ALT工作溶液：
将整个小瓶100X NAD溶液（从1）添加到ALT酶混合物溶液（从2）中，以得到ALT工作溶液。

注意：此ALT工作溶液足以容纳两个96孔板。 它在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，并避免暴露在光线下。或者，可以通过将200μLH₂O加入组分A的瓶子中制成50倍的ALT酶混合物储备溶液，然后通过将储备溶液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD溶液按比例混合来制备ALT工作溶液。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中的ALT标准品和测试样品的布局。 ALT = ALT标准（ALT1-ALT7，1至1000 mU / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.黑色96孔微孔板中ALT标准品和测试样品的布局

1.根据表1和表2提供的布局，将ALT标准品（ALT），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。 注意：如果需要，在含0.1％BSA的DPBS缓冲液中将测试样品稀释至合适的浓度范围（按ALT标准指示）。

2.在ALT标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL ALT工作溶液，以使ALT总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔微孔板，向每孔中加入25 µL ALT工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，在37°C下孵育反应30分钟至60分钟。 注意：空白控件的背景将随着时间而增加。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（佳Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增加。