Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

采用"即混即读"检测方案，兼容高通量液体处理系统。

 

适用范围

用于碱性磷酸酶检测

 

产品介绍

碱性磷酸酶是一种高灵敏度的检测用酶，适用于ELISA、免疫组化及Northern、Southern和Western blot等实验。该酶在各类生物检测（尤其是免疫检测）和ELISA诊断中应用广泛。

Amplite®碱性磷酸酶检测试剂盒采用高灵敏度荧光底物FDP，可精准测定溶液、细胞裂解液及固相载体（如PVDF膜）中的碱性磷酸酶活性。试剂盒提供所有必需组分，采用优化的"即混即测"方案，兼容各类高通量液体处理设备。

 

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	620nm
Em:	660nm
Cutoff:	630nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育30至120分钟
4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止= 630 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1.1 SunRed 底物储备液（250X）：
将100μL双无菌H2O加入到SunRed 底物（组分A）的小瓶中，制备250X SunRed 底物储备溶液。 应立即使用原液。

1.2碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。 注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

 

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS7-AS1）和H2O-0.1％BSA。

 

3.工作溶液

对于一个96孔板，将20μL250XSunRed 底物储备溶液加入到5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。 注意：避免光照并为每个实验准备新鲜的反应混合物。

点击查看细胞制备指南

 

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和实心黑色96孔微孔板中的测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	...	...
AS2	AS2	...	...
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.3至300 mU / mL）
BL	50ul	H2O - 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3在所需温度下将反应温育30至120分钟，避光。

1.4用Ex / Em = 620 / 660nm（截止值= 630nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

 

2.在细胞中运行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。 注意：由于生长培养基与SunRed™底物的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4向每个细胞孔中加入100μL（96孔板）或50μL（384孔板）的1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液。

2.5在所需温度下孵育反应30至60分钟，避光。

2.6用Ex / Em = 620 / 660nm（截止值= 630nm）的荧光板读数器监测荧光增加。