Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒

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适用范围

用于α-酮戊二酸定量检测

产品介绍

α-酮戊二酸（α-ketoglutarate）作为三羧酸循环的关键代谢分子，直接调控机体柠檬酸循环的整体速率。该分子不仅是谷氨酸与谷氨酰胺的生物合成前体，更是胃肠道细胞的核心代谢底物，具有双重生理功能：1）抑制蛋白质分解代谢；2）促进蛋白质合成以增强骨骼肌组织形成。其临床应用涵盖肾脏疾病、胃肠功能障碍（含细菌感染）、肝脏疾病、白内障及复发性酵母菌感染等多种病症的治疗，并可优化血液透析患者的蛋白质代谢效率。

Amplite®™荧光法α-酮戊二酸定量检测试剂盒基于酶偶联反应释放过氧化氢的原理，通过Amplite®™ Red荧光探针（激发/发射波长~540/590 nm，红色荧光）实现对生物样本中α-酮戊二酸的高灵敏度检测。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品（50μL）
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液（50μL）
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中以制备200X储备溶液。

2.标准溶液

2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品（组分D）加入990μLPBS中，得到100μMα-酮戊二酸标准溶液（AKG7）。 然后进行1：2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品（AKG6-AKG1）。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合物1瓶（组分B1）中并充分混合。

3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3将整个小瓶（100μL）的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意：5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品（AKG1-AKG7,0.1至30μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品（AKG），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向α-Ketoglutarate标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸测定工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应在37℃孵育30-60分钟。

4.用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光增加。