Amplite 荧光法天门冬氨酸转氨酶(AST)检测试剂盒

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产品优势

在 100μL 的反应体系中，可检测到低至 2 mU/mL 的 AST

 

适用范围

用于天门冬氨酸转氨酶(AST)检测

 

产品介绍

天冬氨酸氨基转移酶（AST，又称血清谷草转氨酶/GOT）是转移酶家族成员，催化天冬氨酸与谷氨酸间α-氨基的可逆转移，在氨基酸代谢中起关键作用。AST广泛分布于肝脏、心脏、肌肉等组织，健康人群血清中含量较低，但当细胞受损（如急慢性肝炎、梗阻性黄疸、肝癌、心肌梗死）时，AST会大量释放入血导致血清水平显著升高，因此AST检测具有重要临床诊断价值。

Amplite® 荧光法天冬氨酸转氨酶（AST）检测试剂盒为测量多种生物样本中的 AST 提供了一种快速且灵敏的方法。天冬氨酸转氨酶催化天冬氨酸与 α- 酮戊二酸反应生成草酰乙酸和谷氨酸。产物 L - 谷氨酸通过酶偶联反应循环生成红色荧光产物来进行检测，其信号可通过荧光酶标仪读取。

使用 Amplite® 荧光法天冬氨酸转氨酶检测试剂盒，在 100μL 的反应体系中，可检测到低至 2 mU/mL 的 AST。该检测方法稳定性强，能够轻松适用于多种应用场景。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

96孔板测定示例

概述

准备AST反应混合物（50μL）

加入AST标准品或测试样品（50μL）

孵育于37℃，20-30分钟或室温，60分钟

在Ex / Em = 540 / 590nm处监测荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻组分A和B各一瓶。

 

操作方法

1.准备AST标准品的连续稀释液（1至300 mU / mL）：

1.1向DPBS缓冲液中加入所需量的AST阳性对照，制成100 U / mL AST标准溶液。

注意：未使用的AST阳性对照（组分D）应存储在4℃。 不要冻结。

1.2将3μL100U / mL AST标准溶液（来自步骤1.1）加入含0.1％BSA的997 L DPBS缓冲液中，得到300 mU / mL AST标准溶液。

1.3取300μL300mU / mL AST标准溶液进行1：3连续稀释，得到AST标准品的100,30,10,3,1,0.3和0 mU / mL系列稀释液。

1.4如说明书中的表1和2中所述，将AST标准品和含有AST的测试样品的系列稀释液加入到实心黑色96孔微量培养板中。

注意：如果需要，将测试样品稀释至含有0.1％BSA的DPBS缓冲液中的浓度范围。

 

2.准备AST测定混合物：

2.1将100μLDdH2O加入到NAD小瓶（组分C）中，得到100X NAD溶液。

2.2将10 mL AST测定缓冲液（组分B）加入AST Enzyme Mixture瓶中（组分A），并充分混合。

2.3将整瓶100X NAD溶液（来自步骤2.1）加入到AST Enzyme Mixture溶液中（来自Step2.2）使用AST测定混合物。

注意1：该AST测定混合物足以用于两个96孔板。 在室温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免暴露在光线下。

注意2：或者，可以通过向组分A的瓶中加入200μLH2O制备50倍的AST酶混合物原液，然后通过将原液与测定缓冲液（组分B）和100x NAD混合制备AST测定混合物。 按比例解决。 将未使用的50X AST Enzyme Mixture储备液和100X NAD溶液分装并储存在-20℃，避免冻融循环。

 

3.运行AST测定：

3.1将50μL的AST测定混合物（来自步骤2.3）加入AST标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1.4），使得总AST测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLAST测定混合物。

3.2将反应在37°C下孵育20-30分钟或在室温下孵育60分钟，避光。

注意：空白控制的背景随着时间和温度的增加而增加。 如果在37℃下孵育30分钟，背景将很高。

3.3用Ex / Em = 530-570 / 590-600nm的荧光板读数器监测荧光增加（佳Ex / Em = 540 / 590nm，在570nm处截止）。