Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒 *红色荧光*

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产品优势  

1.高灵敏度检测：可检测至0.03 mM钙离子浓度

2.操作便捷高效：30分钟快速完成检测流程

 

适用范围

用于钙离子检测

 

产品介绍

钙离子对所有生物体都至关重要，尤其在细胞生理活动中，钙离子（Ca²⁺）进出细胞质的过程作为信号分子参与调控多种细胞生理功能。作为人体质量占比第五的元素，钙离子不仅是重要的细胞信使，还构成骨骼的主要结构成分。它在血管舒缩调节、神经冲动传导、肌肉收缩和激素分泌等关键生理过程中发挥核心作用。人体血清钙浓度被精确调控在较窄范围内（9-10.5 mg/dL），无论是低钙血症还是高钙血症都属于严重病理状态。慢性肾功能衰竭、维生素D缺乏以及严重酒精中毒导致的低镁血症均可引发低钙血症。

Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒，为生理溶液中钙离子检测提供了简便解决方案：该试剂盒采用96孔或384孔微孔板形式，无需分离步骤且可自动化操作，30分钟内即可完成检测，配合荧光酶标仪使用可检测至0.03 mM钙离子浓度。

样品实验方案

简要概述

1.准备测定反应混合物（50μL）
2.添加钙标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育5-30分钟
4.监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

 

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1.1Rhod Red 原液（200X）：
将50μL无菌H2O加入Rhod Red 指示剂（组分A）的小瓶中。混匀后避光保存

 

2.标准溶液配制

钙标准溶液配制
通过将适量的300mM钙标准品（组分C）稀释到H 2 O中来制备钙标准品。推荐浓度范围：0-3mM

可使用在线稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/36360

 

3.工作溶液配制

将25μLRhodRed 储备溶液（200X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.025mL。避光保存。

 

操作步骤

 

表1.实心黑色96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。

CS =钙标准品（CS7-CS1,0.003至3mM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
CS1	CS1	...	...
CS2	CS2	...	...
CS3	CS3
CS4	CS4
CS5	CS5
CS6	CS6
CS7	CS7

 

表2.每个孔的试剂组成。

孔	规格	试剂
CS1-CS7	50ul	连续稀释液（0.003至3 mM）
BL	50ul	水
TS	50ul	测试样本

 

1.根据表1和2中提供的布局制备钙标准品（CS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液，使总钙测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下避光孵育反应5至30分钟。

4.用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光强度。

 

试剂应用文献

Ca2+ transients on the T cell surface trigger rapid integrin activation in a timescale of seconds
Authors: Li, Yue and Wang, ShiHui and Zhang, YouHua and Liu, ZhaoYuan and Zheng, YunZhe and Zhang, Kun and Chen, ShiYang and Lv, XiaoYing and Huang, MengWen and Pan, XingChao and others,
Journal: Nature Communications (2024): 1--16